en طراحي يك روش الايزا با استفاده از آنتي‌ژن‌هاي سطحي اسپرم جهت اندازه‌گيري آنتي‌بادي ضد اسپرم و مقايسه آن با تست SpermMar مقدمه: تاثير آنتي‌بادي ضداسپرم با ميزان شيوع 26-6% در ايجاد ناباروري به خوبي شناخته شده‌است. لذا اندازه‌گيري آن در سرم و يا مايعات بيولوژيك مردان و زنان از اهميت كلينيكي برخوردار است. امروزه يكي از مهمترين موضوعات مورد بحث در ناباروري ايمونولوژيك، طراحي روشي استاندارد جهت اندازه‌گيري ASA مي‌باشد. مطالعات انجام شده نشان مي‌دهند كه روش الايزا در بين روش‌هاي تشخيص ASA، در صورتي‌كه از آنتي‌ژن‌هاي سطحي اسپرم با حداقل آلودگي به آنتي‌ژن‌هاي غير‌اسپرمي وآنتي‌ژن‌هاي داخلي اسپرم استفاده گردد، روشي بسيار حساس و قابل اعتماد بوده و بهتر از ساير روش‌هاي تشخيص و اندازه‌گيريASA مي‌باشد. بنابراين هدف از مطالعه حاضر طراحي يك روش الايزا با روش قابل قبول استخراج آنتي‌ژن‌هاي سطح اسپرم و با حداقل آلودگي به ساير پروتئين‌‌هاي اسپرم جهت تعيين ميزان ASA مي‌باشد. مواد و روشها: در اين مطالعه، تكنيك الايزاي غيرمستقيم با استفاده از سه روش مختلف استخراج آنتي‌ژن‌هاي سطح اسپرم شامل روش سونيكاسيون، استفاده از دترجنت سديم دودسيل سولفات و نيز استفاده از دترجنت ليتيوم دي‌يدوساليسيلات، طراحي گرديد. در نهايت پس از طراحي روش، الايزاي طراحي شده با آنتي‌ژن حاصل از سه روش مختلف استخراج آنتي‌ژن‌هاي سطح اسپرم، به همراه دو كيت الايزاي تجاري مشابه با تست روتين مراكز درمان ناباروري (SpermMar) مورد مقايسه قرار گرفته است. نتايج: در تجربه عملي از 28 سرم مشكوك به ASA كه توسط تستSpermMar ، 16 مورد جواب مثبت داشتند، به روش الايزاي طراحي شده با آنتي‌ژن‌هاي حاصل از دترجنت LIS، 14 سرم، جواب مثبت حقيقي نشان داد و تنها 2 مورد جواب منفي كاذب وجود داشت و جواب مثبت كاذب نيز مشاهده نگرديد؛ در حاليكه در روش سونيكاسيون فقط 5 مـورد مثبت حقيقي داشت و 11 مورد جواب منفي كاذب نشان ‌داد. روش استفاده از دترجنت SDS نيز 13 مـورد مثبت حقيقي، 3 مورد جواب منفي كاذب و 4 مورد جواب مثبت كاذب نشان داد. به علاوه، دو كيت تجاري به ترتيب 7 و4 مورد جواب مثبت حقيقي نشان داد. در هر دو كيت‌هاي تجاري 1 مورد جواب مثبت كاذب و نيز به ترتيب با 9 و12 مورد جواب منفي كاذب همراه بودند. براساس نتايح حاصل روش الايزا با استفاده از دترجنت LIS، حساسيت(5/87%) مناسبي داشته و از ويژگي و كارآيي بسيار بالايي در مقايسه با ساير روش‌ها برخوردار است (به ترتيب 100% و 8/92%). از طرف ديگر همبستگي معني‌داري نيز بين روش طراحي شده وSpermMar وجود دارد(572/0=r). نتيجه گيري: براساس نتايج اين مطالعه روش الايزاي طراحي شده با استفاده از آنتي‌ژن‌هاي استخراج شده از سطح اسپرم به كمك دترجنت LIS داراي حداقل نتايج كاذب است و بهتر از ساير روش‌هاي استخراج آنتي‌ژن‌هاي سطحي اسپرم و كيت‌هاي مشابه خارجي جهت تشخيص و تعيين ميزان ASA مي‌باشد. Introduction: The role of antisperm antibodies with a prevalence of 6-26% is well known in immunological infertility. Thus, there is clinical importance to determine ASA levels in both male and female. Nowadays, one of the most important discussed controversies in the field of immunological infertility is establishing an standard method to determine ASA. It seems that ELISA method will be more sensitive, specific and more diagnostic in determination of ASA if sperm surface antigens could be used as coated antigens, with least contamination to sperm intracellular antigens and nonspermic antigens. So, the aim of this study is designing an ELISA method by using the best method of sperm antigens extraction with at least contamination. Materials and Methods: In this study we designed an ELISA method with three different extraction methods of sperm antigens including sonication method, using SDS detergent, and application of LIS detergent, then we compared ELISA method based on the three extraction methods as well as two similar commercial ELISA kit (IBL Co, and Bioserv Co) with SpermMar test. Results: Comparing designed method with commercial kit indicated that among 28 sera which had 16 positive sera and 12 negative sera by SpermMar, 14 sera were true positive by LIS method and only 2 cases were false negative without any false positive results, whereas there were 5 true positive results and 11 cases false negative by the sonication method. The SDS method also had 13 true positive results with 3 false negative and 4 false positive results. In addition, two commercial kit had in turn 7 and 4 cases true positive and both of them had 1 case false positive and in turn 9 and 12 cases with false negative result. ELISA method designed by LIS detergent has adequate sensitivity (87.5%) with higher specificity (100%) and efficacy (92.8 %) than other extraction methods. There is a significant correlation between this designed method and SpermMar test (r=0.572). Conclusion: The results of this study indicated that ELISA method by LIS antigens has at least contamination with nonspermic antigens and it is better than other extraction methods and commercial ELISA kits for detection of antisperm antibody. ناباروری، اسپرم، آنتی بادی ضد اسپرم، الایزا، لیتیوم دی یدوسالیسیلات، آنتی ژنهای سطح اسپرم Infertility, Sperm, Antisperm antibody, ELISA, SpermMar, LIS, Sperm surface antigens 23 35 https://www.jri.ir/article/140 https://www.jri.ir/documents/fullpaper/fa/140.pdf AsgharTalebianReproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR, Tehran, Iranاصغرطالبيان324Amir HassanZarnaniMonoclonal Antibody Research Center, Avicenna Research Institute (ACECR), Tehran, Iranامیرحسنزرنانی241MahmoodJeddi-TehraniMonoclonal Antibody Research Center, Avicenna Research Institute (ACECR), Tehran, Iranمحمود جدی‌تهرانی54Mohammad MehdiAkhondiReproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR, Tehran, Iranمحمدمهدیآخوندی21MahmoudJalaliHuman Nutrition and Biochemistry Department, Faculty of Public Health, Tehran Medical Sciences University, Tehran, Iranمحمودجلالي60Mohammad RezaSadeghiReproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR, Tehran, Iran محمدرضاصادقیSadeghi@avicenna.ac.ir77