en اثر مهاري مايع رويي كشت سلول‌هاي دسي‌جواي موش بر عرضه آنتي‌ژن توسط سلول‌هاي دندريتيك مقدمه: با وجود اينكه آنتي‌ژن‌هاي جنيني براي سيستم ايمني مادر بيگانه هستند، ولي معمولاً جنين دفع نمي‌شود و در تمام مدت حاملگي توسط سيستم ايمني مادر تحمل مي‌گردد. مكانيسم‌هاي ايمونولوژيكي كه جنين را از خطر دفع شدن حفاظت مي‌كنند هنوز كاملاً شناخته نشده‌اند. يكي از نظريه‌هاي مهم در اين زمينه، وجود فاكتورهاي سركوب‌گر ايمني در محل تماس مادر- جنين است كه موجب سركوب پاسخ‌هاي ايمني مادر بر عليه جنين مي‌شوند. عليرغم مطالعات وسيعي كه در مورد تأثير مايع رويي كشت سلول‌هاي دسي‌جوا و جفت بر روي عملكرد سلول‌هاي مختلف سيستم ايمني صورت گرفته، تاكنون هيچ مطالعه‌اي در مورد تأثير اين عوامل بر روي عملكرد سلول‌هاي دندريتيك به عنوان مهمترين سلول‌هاي پاسخ ايمني ذاتي انجام نگرفته است. هدف اين مطالعه بررسي اثر مايع رويي محيط كشت سلولهاي دسي‌جوا بر عرضه آنتي‌ژن توسط سلولهاي دندريتيك در شرايط in vivo بود. مواد و روشها: مايع رويي كشت 48 ساعته سلول‌هاي دسي‌جواي موش‌هاي حامله آلوژن(Balb/c×C57BL/6) در روز دوازدهم حاملگي جمع‌آوري شد و تاثير آن روي عرضه آنتي‌ژن توسط سلولهاي دندريتيك مورد ارزيابي قرار گرفت. سلول‌هاي دندريتيك طحال موش‌هاي Balb/c با استفاده از روش‌هاي چهار مرحله‌اي شامل هضم آنزيمي بافت توسط كلاژناز، جداسازي سلول‌هاي كم‌چگال با استفاده از گراديان اپتي‌پرپ (Optiprep)، اتصال به پلاستيك و كشت شبانه تخليص گرديد. خلوص سلول‌هاي دندريتيك با استفاده از آنتي‌بادي ضد CD11c به روش فلوسيتومتري تعيين شد. سلول‌هاي دندريتيك در طي كشت شبانه با آنتي‌ژن بارگذاري شدند. در برخي از كشت‌ها سوپ دسي‌جوا به نسبت 5%، 10% و 20% به سلول‌هاي دندريتيك اضافه شد. سلول‌ها‌ي مزبور به كف پاي موش‌هاي هم‌نژاد تزريق و پس از 5 روز غدد لنفاوي ناحيه‌اي خارج گرديد. سلول‌هاي غدد لنفاوي در مجاورت آنتي‌ژن كشت داده شدند و ميزان تكثير سلول‌ها در روز چهارم با اضافه كردن تيميدين راديواكتيو اندازه‌گيري شد. نتايج: نتايج حاصل نشان داد كه سلول‌هاي دندريتيك بارگذاري شده با آنتي‌ژن پس از تزريق به موش لنفوسيت‌هاي اختصاصي به آنتي‌ژن را شديداً حساس مي‌كنند، به طوري كه تحريك مجدد لنفوسيت‌هاي مذكوربا آنتي‌ژن اوليه موجب تكثير بسيار شديد اين سلول‌ها مي‌گردد (363289210cpm=). اضافه كردن مايع رويي كشت سلول‌هاي دسي‌جوا در تمام غلظت‌هاي مورد استفاده بر روي كشت سلول‌هاي دندريتيك توانايي عرضة آنتي‌ژن توسط اين سلول‌ها را به طور قابل ملاحظه‌اي مهار كرد و ميزان تكثير لنفوسيت‌هاي حساس شده با سلول‌هاي دندريتيك مذكور در تحريك مجدد با آنتي‌ژن به طور معني‌داري كاهش يافت (582 6200 cpm=) ( 0001/0 p<). نتيجه‌گيري: اين اولين گزارش در زمينه اثر مايع رويي كشت سلولهاي دسي‌جوا بر عملكرد سلولهاي دندريتيك و عرضه آنتي‌ژن توسط آنها است. به نظر مي‌رسد مهار عرضه آنتي‌ژن توسط سلولهاي دندريتيك يكي از راه‌كارهاي تحمل ايمونولوژيك مادر نسبت به جنين باشد، چرا كه اين سلولها به عنوان قويترين سلولهاي عرضه‌كننده آنتي‌ژن مي‌توانند آنتي‌ژنهاي پدري را به لنفوسيت‌هاي مادر عرضه كرده و موجب القاي پاسخ‌هاي مخرب ايمونولوژيك بر عليه جنين گردند. Introduction: Despite the unrecognized nature of fetal antigens for maternal immune system, the fetus is usually not rejected and is rather sustained by maternal immune system. The immunological mechanisms that protect the fetus from rejection are not completely understood. One of the main hypotheses is the appearance of immuno-suppressive factors in the feto-maternal interface that suppress maternal immune responses against the fetus. Although the effects of decidual or placental cell culture supernatants on the function of different immune cells have been studied, the effects of such factors on dendritic cells (DCs) have not been evaluated yet. In this study the immunomodulatory activity of decidual cell culture supernatants on in vivo antigen presentation by DCs has been addressed. Materials and Methods: Decidual cells obtained from the uteri of allogenic pregnant mice (Balb/c× C57BL/6) on day 12 post conception, were cultured for 48 hours and supernatants collected. DCs were purified from Balb/c mice spleens by a four step method including collagenase digestion of splenic tissues, selection of low density cells by Optiprep density gradient centrifugation, plastic adherence and overnight culture. The purity of dendritic cells was detected by flow cytometry method using anti CDllc antibodies. During overnight cultures, DCs were pulsed with antigen. In some cultures decidual supernatants were added at 5%, 10% or 20% fractions of the final volume. Antigen pulsed DCs were injected into the footpads of syngeneic mice and after 5 days, draining lymph nodes were excised. Lymph node cells of immunized mice were cultured in the presence of antigen and the rates of cell proliferation were measured on the 4th day by thymidine incorporation. Results: The results showed that antigen-pulsed DCs primed antigen-specific lymphocytes efficiently and the primed lymphocytes did proliferate vigorously in response to recall antigen in vitro (cpm=89210 3632). Treatment of DCs with decidual culture supernatants by any concentration, markedly blocked antigen presention by these cells and significantly reduced the extent of antigen-specific proliferation of lymphocytes primed with such DCs. (cpm= 6200582) (p<0.0001). Conclusion: To our knowledge this is the first report on the effect of decidual culture supernatants on antigen presentation by DCs. It seems that inhibition of antigen presentation by DCs is one of the main mechanisms of maternal immunological tolerance to the fetus since DCs, as the most potent antigen presenting cells, could potentially present paternal antigens to maternal T lymphocytes and thereby provoke destructive immunological responses to the fetus. سلول های دندریتیک، عرضه آنتی ژن، دسی جوا، مایع رویی کشت، بارداری، جنین Dendritic cell, Antigen presentation, Decidua, Cell culture supernatant, Pregnancy, Fetus 115 129 https://www.jri.ir/article/147 https://www.jri.ir/documents/fullpaper/fa/147.pdf Amir HassanZarnaniReproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR, Tehran, Iranامیرحسنزرنانی241Seyyed MohammadMoazzeniImmunology Department, Faculty of Medical Science, Tarbiat Modarres University, Tehran, Iranسيد محمدموذنيmoazzeni@dr.com242FazelShokriImmunology Department, Faculty of Medical Science, Tehran University of Medical Science, Tehran, Iranفاضل شكري 140MojdehSalehniaAnatomy Department, Faculty of Medical Sciences, Tarbiyat Modares University, Tehran, Iranمژدهصالح نيا243MahmoodJeddi-TehraniReproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR, Tehran, Iranمحمود جدی‌تهرانی54