en بررسي خصوصيات آنتي‌ژن‌هاي‌ سطحي اسپرم انسان توسط آنتي‌بادي منوكلونال HS56 مقدمه: با وجود پيشرفت و گسترش تحقيقات در زمينه توليد مثل و ناباروري و به ‌ويژه فرآيند لقاح، در حال حاضر تعداد اندكي از آنتي‌ژن‌هاي مؤثر در فرآيند لقاح در سطح اسپرم و تخمك، شناسائي شده است. مطالعة اين مولكول‌ها و بررسي خصوصيات بيوشيميايي، بيوفيزيكي و فيزيولوژيكي آنها، درك هرچه بهتر فرآيند لقاح را تسهيل مي‌كند. گذشته از آن، علت اصلي درصد بالايي از ناباروري‌هاي با علت نامشخص كه ناشي از وجود نقايص مولكولي آنتي‌ژن‌هاي دخيل در عمل لقاح مي‌باشند، لذا هدف اين مطالعه تعيين خصوصيات آنتي‌ژن مورد شناسائي توسط آنتي‌بادي منوكلونال HS56 مي‌باشد. مواد و روشها: سلول‌هاي هيبريدوماي مولد آنتي‌بادي منوكلونال HS56 عليه آنتي‌ژن سطحي اسپرم انسان به صفاق موش‌هاي نر بالغ 8-6 هفته تزريق شدند تا مقادير زياد آنتي‌بادي از مايع آسيت، به‌دست آيد. آنتي‌بادي مذكور توسط ستون افينيتي كروماتوگرافي پروتئين G، تخليص و ايزوتيپ اين آنتي‌بادي توسط آزمون الايزا تعيين گرديد. آنتي‌ژن‌هاي سطحي اسپرم انسان توسط ليتيوم ‌دي‌يدوساليسيلات (LIS) استخراج و الكتروفورز SDS-PAGE روي اين آنتي‌ژن‌ها انجام گرفت. به منظور تعيين وزن مولكولي و برخي خصوصيات بيوشيميايي آنتي‌ژن مورد نظر، وسترن بلاتينگ انجام شد و محل قرارگيري اين آنتي‌ژن در سطح اسپرم انسان به كمك آزمون ايمنوفلورسانس غيرمستقيم بررسي شده و در نهايت تأثير يا عدم تأثير اين آنتي‌ژن در واكنش آكروزومي مورد بررسي قرار گرفت. تحليل داده‌ها بر اساس مقايسه داده‌هاي زوج شده و آزمون Wilcoxon Signed Ranks Test انجام و سطح معني‌داري، 05/0 در نظر گرفته شد. نتايج: با تكنيك‌ SDS-PAGE الگوي الكتروفورتيك آنتي‌ژن‌هاي استخراج شده با نمك LIS، مشاهده شد و با آزمون الايزا مشخص شد كه آنتي‌ژن مورد شناسايي توسط آنتي‌بادي منوكلونال HS56، در مجموعه آنتي‌ژني استخراج شده از سطح اسپرم با استفاده از LIS، وجود دارد. ايزوتيپ آنتي‌بادي منوكلونال HS56 از نوعIgG1 تعيين شد. پس از انجام وسترن بلاتينگ، مشخص شد كه وزن مولكولي آنتي‌ژن مورد نظر حدود kDa2±56 است و در ساختار مولكول پروتئين مورد نظر، باند دي‌سولفيدي وجود دارد. آزمون ايمنوفلورسانس غيرمستقيم نشان داد كه محل قرارگيري اين آنتي‌ژن در ناحية آكروزومي و گردن اسپرم مي‌باشد. با مجاور نمودن آنتي‌بادي منوكلونال با اسپرم و القاء واكنش آكروزومي، مشخص شد كه بلوكه كردن اين اپي‌توپ با آنتي‌بادي منوكلونال HS56، تأثيري در واكنش آكروزومي ندارد (11/0 =P). نتيجه‌گيري: براساس بررسي‌هاي انجام شده، هرچند آنتي‌ژن HS56 در ناحيه آكروزومي و سراسپرم قرار دارد ولي نقش اساسي در فرآيند واكنش آكروزومي دارا نمي‌باشد. بررسي بيشتر اين آنتي‌ژن بوسيله تخليص و بررسي ساختار مولكولي آن و نيز نقش آن در اتصال اسپرم و تخمك، ارزش اين آنتي‌بادي را مشخص خواهد نمود. Introduction: Surface antigens of ovum and sperm have key role in the fertilization process. In this regard, study of these molecules and their biochemical, biophysical and physiological characteristics could be helpful in understanding the mechanism of fertilization. Moreover, many cases of infertility with unknown ethiology have been revealed to have defects in these molecules. This will further emphasize on the importance of molecules involved in fertilization. The aim of this study was to characterize the sperm sur-face antigen recognized by the monoclonal antibody HS56. Materials and Methods: Clone HS56 with known specificity to human sperm antigen were injected perit-oneally into the balb/c mice and the produced antibody was purified over protein- G affinity chromato-graphy column. The isotype of the monoclonal antibody (mAb) was determined by Enzyme-Linked Immu-nosorbent Assay (ELISA). Surface antigens extracted from human sperm by lithinm 3,5 diiodosalicylate (LIS) method were run on SDS-PAGE and the molecular weight of antigen recognized by HS56 mAb was determined by western blotting. For localization of this antigen, indirect immunofluorescence staining was performed. Finally involvement of this antigen in acrosome reaction was tested by inhibition assay. Wil-coxon test was used for statistical analysis. Results: By LIS extraction method many sperm antigens were isolated and seen on SDS-PAGE using ELISA, It was found that LIS extraction was a useful method for isolation of antigen recognized by HS56 mAb. The subclass of the mAb HS56 was shown to be IgG1. The molecular weight of the antigen was determined to be about 56±2 KDa and the molecule included disulfide bond (s) in its structure. The antigen of interest was localized on acrosome and midpeace region of human sperm. Finally our results showed that this antigen had no effect on acrosome reaction (P=0.11). Conclusion: Although the HS56 antigen does not play an important role in acrosome reaction, its further characterization with regard to sperm-oocyte binding may reveal a role in fertilization process. اسپرم، آنتی ژنهای سطح اسپرم، آنتی بادی منوکلونال، واکنش آکروزومی، باروری Sperm, Sperm surface antigens, Monoclonal antibody, Acrosome reaction, Fertility 290 299 https://www.jri.ir/article/163 https://www.jri.ir/documents/fullpaper/fa/163.pdf Seyyed Ahmad RezaMahmoudiMonoclonal Antibody Research Center, Avicenna Research Institute (ACECR), Tehran, Iranسيد احمدرضامحمودي361RoyaGhodsMonoclonal Antibody Research Center, Avicenna Research Institute (ACECR), Tehran, Iranرويا قدس 138Amir HassanZarnaniMonoclonal Antibody Research Center, Avicenna Research Institute (ACECR), Tehran, Iranامیرحسنزرنانی241MahnazHeidariReproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR, Tehran, Iranمهنازحيدري240Ali AhmadBayatMonoclonal Antibody Research Center, Avicenna Research Institute (ACECR), Tehran, Iranعلي احمدبيات244EbrahimTorkabadiReproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR, Tehran, Iranابراهیمترک‌آبادی362Mohammad MehdiAkhondiMonoclonal Antibody Research Center, Avicenna Research Institute (ACECR), Tehran, Iranمحمدمهدیآخوندی21KazemParivarDepartment of Biology, Faculty of Sciences, Islamic Azad University, Science & Research Campus, Tehran, Iranكاظم پريور358MahmoodJeddi-TehraniMonoclonal Antibody Research Center, Avicenna Research Institute (ACECR), Tehran, Iranمحمود جدی‌تهرانی54Mohammad RezaSadeghiMonoclonal Antibody Research Center, Avicenna Research Institute (ACECR), Tehran, Iran محمدرضاصادقیsadeghi@avicenna.ac.ir77