en اثرات ضديخ‌های مختلف بر ميزان شكست DNA در جنين‌های خوک توليد شده به روش In vitro زمينه و هدف: تاکنون از ضديخ‌های زيادی جهت انجماد جنين‌های مرحله قبل از لانه‌گزينی به منظور جلوگيری از تشکيل يخ داخل سلولی استفاده شده است، ولي با اين وجود تعداد زيادي از جنينها پس از ذوب به دلايل مختلفي از جمله نوع ضديخ مورد استفاده و به دنبال آن شكست DNA جنين، در اثر سميت ضديخ از بين مي‌روند. اتيلن‌گليکول، 1و2 پروپانديول و گليسرول ضديخ‌های معمول می‌باشند که به طور وسيعی برای انجماد جنين حيوانات گوناگون و همچنين انسان استفاده مي‌شود. هدف از مطالعه حاضر، بررسی اثرات ضديخ‌های مختلف روی ميزان شكست DNA بلاستوسيست‌های خوک به منظور تعيين ضديخ مناسب برای انجماد جنين خوک بود. روش بررسي: تعداد 197 بلاستوسيست خوک به روش In vitro توليد شدند و به طور تصادفي به چهار گروه تقسيم گرديدند. تعداد 40 بلاستوسيست به‌عنوان گروه كنترل به مدت يک ساعت در محلول PBSبدون ضديخ قرار گرفتند. بقیه بلاستوسيستها در سه گروه متفاوت در معرض 3 نوع محلول ضديخ با غلظت 10% به مدت يک ساعت در يك روش 3 مرحله‌اي در درجه حرارت اتاق قرار گرفتند. به‌طوریکه40 بلاستوسيست در معرض اتيلن‌گليکول و 40 بلاستوسيست در معرض 1و2 پروپانديول و 40 بلاستوسيست در معرض گليسرول قرار گرفتند. شواهد مورفولوژيك از زنده ماندن بلاستوسيستها پس از 24 ساعت كشت مجدد در گروه‌هاي مختلف در محيط NCSU-37، براساس تشکيل مجدد حفره بلاستوسل به وسيله مشاهده استريوميکروسکوپي با بزرگنمايي 40 برابر ارزيابی گرديد. شاخص ميزان شكست DNA در آنها پس از نشانه‌گذاری با تكنيك TUNEL و رنگ‌آميزي زمينه‌ای با PI مشخص شد. داده‌ها با آناليز واريانس و آزمون تعقيبی فيشر و با كمك نرم افزار Stutview مورد تجزيه و تحليل قرار گرفت و سطح معني‌داري 05/0 در نظر گرفته شد. نتايج: قرار گرفتن بلاستوسيست‌هاي خوک در معرض ضديخ‌های مختلف، منجر به افزايش تعداد هسته‌هايی با شكست DNA می‌شود. در ضمن، ميزان شاخص شكست DNA در بلاستوسيست‌های دارای بلاستوسل نسبت به بلاستوسيست‌های فاقد بلاستوسل، بدون توجه به نوع ضديخ کمتر بود. نتيجه‌گيري: براساس نتايج اين مطالعه در معرض ضديخ قرار گرفتن بلاستوسيست‌های خوک، ميزان شكست DNA را افزايش مي‌دهد و در اين ميان اتيلن‌گليکول کمترين ميزان سميت را دارد. Introduction: The aim of the present study was to investigate the effects of different cryoprotectants (CPs) on DNA fragmentation of in vitro produced blastocysts to determine an appropriate cryoprotectant for embryo cryopreservation. Therefore, the precise aims of the study were to assess the toxic effects of different cryoprotectants in terms of survival rate and to evaluate the effects of different CPs on DNA fragmentation in in vitro produced porcine blastocysts. Ethylene glycol, 1,2 propanediol and glycerol are common cryoprotectants widely used for embryo cryopreservation in different animals as well as humans. Materials & Methods: 197 porcine blastocysts were produced in vitro and 160 blastocysts were random-ly selected and divided into 4 groups. 40 blastocysts were placed in phosphate buffer solution (PBS) with-out any cryoprotectants for 1 hour in room temperature (23-25C) as the control group. The rest of the blastocysts were exposed to 3 different cryoprotectants (10% solutions) ethylene glycol (EG), 1, 2 pro-panediol (PG) and glycerol (Gly) for 1 hour in a 3- step method in room temperature. The survival rate was assessed after culture in NCSU-37 medium for 24 hours as the proportion of recovered embryos with the reformation of blastocele observed by stereomicroscopy at 40 magnifications. The apoptotic indices were evaluated after staining by TUNEL technique to label apoptotic nuclei and later were counter-stained by propidium iodide (PI) to label all nuclei and were analyzed by fluorescent microscopy. Then, the sur-vival rate was compared with the data obtained from the control group. Through ANOVA and Fishers exact test the data were analyzed while employing StatView software and the level of significance was considered as 0.05%. Results: Exposing porcine blastocysts to different cryoprotectants results in an increase in DNA fragmentation, although the apoptotic index in blastocysts with blastocele compared to those without them were lower in the study, disregard of the kind of cryoprotectant. Conclusion: It is concluded that CPs can decrease the survival rate of porcine blastocysts by increasing the percentage of DNA fragmentation but EG has the least effect on DNA fragmentation. ضد یخ، سمیت سلولی، خوک، شکست DNA، بلاستوسیست، آپوپتوزیس Cryoprotectants, Cytotoxicity, Apoptosis, Pig, DNA fragmentation, Blastocyst 37 45 https://www.jri.ir/article/222 https://www.jri.ir/documents/fullpaper/fa/222.pdf FarzadRajaeiCell Culture Laboratory, Department of Anatomy, Qazvin University of Medical Sciences, Ghazvin, Iranفرزادرجاييfrajaei@qums.ac.ir321TakshijOtoiDepartment of Reproduction, Faculty of Veterinary, Yamaguchi University, Yamaguchi, Japanتاکشيجاتويی503