2000 1 2 2 82

Evaluation of Rat Sperm Motility by CASA 2 1 مقدمه بررسی‌های متعدد آزمایشگاهی، مؤید این حقیقت است که اسپرم پستانداران پس از خارج شدن از بیضه‌ها و داخل شدن در اپیدیدم، حرکت پیشرونده‌ای نداشته و یا این حرکت بسیار ناچیز بوده است (5). اسپرم پس از انتقال و عبور از طول اپیدیدیم، بتدریج توانایی کامل برای حرکت پیشرونده را کسب می‌نماید. اگر چه اسپرم در داخل بدن پستانداران (بیضه و اپیدیدیم) ساکن و بی‌حرکت است، ولی توانایی حرکتی اسپرم با رقیق شدن در محیط کشت‌های مناسب آزمایشگاهی، قابل بازیافت و مطالعه است (1،2). در ارتباط با بررسی میزان تغییرات و بلوغ اسپرم در طول اپیدیدیم و همچنین بررسی تأثیر سلول‌های اپیتلیال اپیدیدیم بر بلوغ اسپرم، وجود یک متد کمی اندازه‌گیری حرکت اسپرم ضروری است (16،17). هدف از این تحقیق و مطالعه، بررسی امکان استفاده از آنالیزر کامپیوتری اسپرم [Computer Assisted Sperm Analyser (CASA)]، برای داشتن یک مقیاس روشن اندازه‌گیری حرکت اسپرم رت می‌باشد. پس از ارزش‌گذاری و بدست آوردن معیارهای ارزیابی مناسب، این سیستم قادر خواهد بود که بلوغ آزمایشگاهی اسپرم را بررسی نماید. آنالایزر کامپیوتری اسپرم (CASA) با داشتن یک آنالیز تصویری کامپیوتری پیشرفته و جالب (شامل سخت افزار و نرم افزار)، امکان ردیابی الکترونیکی اسپرم را دارا است (11). مطالعه بر روی اسپرم تعدادی از پستانداران نشان داده است که پارامترهای حرکتی اسپرم بعنوان مثال حرکت پیشرونده Progressive velocity، جابجایی سر اسپرم (Lateral head displacement) بستگی مستقیمی به توانایی باروری اسپرم در داخل بدن و یا خارج از بدن را دارد (10،16،19). تلاش برای اندازه‌گیری تغییرات کمی حرکت اسپرم رت در روند بلوغ (7) شامل ارزش‌گذاری منحصر به اسپرم رت (8،20) اندازه‌گیری تعداد زدن دم (9) و استفاده از CASA می‌باشد (23) در آخرین گزارشها تنها تعداد نسبتاً کمی از اسپرم (300-100) بطور مداوم و مرتب و حداکثر در فواصل زمانی کوتاه مدت 67% ثانیه مورد آنالیز قرار گرفته است. مطالعه حاضر از آنالایزر کامپیوتری اسپرم (CASA) با برتری‌های ویژه برای آنالیز (Hobson Sperm Tracker) و همچنین آنالایزرهای تصویری دیگر برای اندازه‌گیری جزئیات تغییر در پارامترهای حرکتی اسپرم رت در هنگام روند بلوغ و پس از انزال استفاده شده است. مواد و روشها حرکت اسپرم رت در روند بلوغ داخل بدن تهیه و آماده‌سازی اسپرم اپیدیدیم رت رت‌های بالغ با ضربه‌ای محکم بر سر آنها کشته شدند. اپیدیدیم در شرایط استریل، از بدن خارج و در داخل محیط کشت RPMI-1640 از خون و چربی عاری و شستشو داده شده و سپس در یک پتری دیش کوچک آزمایشگاهی (35 میلی‌متری) و در محیط کشت محتوی آنتی‌بیوتیک قرار داده شد. اپیدیدیم به چند قسمت مجزا تقسیم و این تقسیمات هر کدام در داخل یک خانه از پلیت 24 خانه حاوی 5/0-25/0 میلی‌لیتر از محیط کشت فوق حاوی BSA (آلبومین سرم گاوی) و آنتی‌بیوتیک قرار داده شد. قطعات اپیدیدیم مجدداً با قیچی به قطعات ریزتری تقسیم و بمدت 20-15 دقیقه داخل انکوباتور C37 قرار داده شد. سپس بافت‌های قطعه قطعه شده از محیط کشت خارج و سوسپانسیون اسپرم بدست آمده، مجدداً تا زمان استفاده در انکوباتور نگهداری شد. تهیه و آماده‌سازی اسپرم انزال شده رت متأسفانه جمع‌آوری اسپرم حاصل از انزال رت با تحریک مستقیم حیوان ممکن نیست. بنابراین اسپرم باید پس از ارتباط جنسی طبیعی از واژن جنس مخالف جمع‌آوری شود. بدین منظور رت‌های ماده 300-250 گرمی در داخل قفس‌های مجزای از رت‌های نر قرار داده شده و تحت مشاهده مستقیم قرار گرفتند. رت‌های ماده در زمان ایستروس رفتار جنسی متفاوتی را همراه با ارتباط جنسی در مدت 5-2 دقیقه پس از قرار داده شدن در قفس نشان می‌دادند. پس از 30 دقیقه و انجام حدود 50-30 بار انزال توسط رت نر، رت ماده از قفس جدا و به روش توضیح داده شده کشته شد. ناحیه تناسلی در شرایط استریل خارج و موضع بالای واژن و پایین رحم باز شد. توده اسپرم بسیار غلیظ و با ویسکوزیته بالا بوسیله اسپاچولای استریل کوچک برداشته و بداخل 1-5/0 میلی‌لیتر محیط کشت منتقل شد. رت‌هایی که در مدت 5-2 دقیقه هیچگونه ارتباط جنسی را نشان ندادند، از هم جدا و به قفس‌های خود بازگردانده شدند. تهیه رقت مناسب از اسپرم با روش قطره‌ای (Droplet Method) مقداری اسپرم از سوسپانسیون تهیه شده اصلی برداشته و بمیزان 1065 اسپرم در هر میلی لیتر رقیق و سپس l3 از این اسپرم رقیق شده به داخل l27 از از قطره محیط کشتی که وسط یک پتری دیش کوچک 35 میلی متری اضافه شد که سطح آن با روغن پارافین پوشیده شده بود. تهیه رقت مناسب از اسپرم با روش لام و لامل (Coverslip Method) 30 میکرولیتر از اسپرم رقیق شده با روش فوق در وسط یک پتری دیش کوچک 35 میلی متری قرار داده شده و با یک لامل شیشه‌ای به ابعاد 2222 میلی‌لیتر پوشانده شد. عمق این میزان محیط کشت حاوی اسپرم، بین لامل و کف پلیت حدود 60 میکرومتر می‌باشد و این در صورتی است که محیط کشت از اطراف لامل منتشر نشود. روی لامل برای کنترل رطوبت و گرما با روغن پارافین پوشیده شد. آنالیز حرکت اسپرم نواحی مختلف اپیدیدیم رت توسط آنالایزر کامپیوتری اسپرم (CASA) اسپرمهای آماده شده به روش‌های فوق در داخل میکروسکوپ اینورت نیکون (Nikon UK, Ltd.) که اطراف آن با یک کابینت، با قابلیت تنظیم درجه حرارت هوای داخل آن بطور اتوماتیک روی C37، قرار داده شد. میکروسکوپ حاوی یک صفحه اتوماتیکی (Prior Scientific Instruments Ltd., UK) یک دوربین ویدیوئی (Pulnix Ltd.) London, 05 Lux متصل به آنالایزر حرکتی اسپرم (Hobson Sperm Tracker, Hobson Tracking System Ltd; Sheffild, UK) و یک ویدئو بود. استفاده از این نوع آنالایزر اسپرم، تأثیر جدی بر نتایج بررسی داشت. تنظیم این آنالایزر اسپرم بگونه‌ای است که دقیقاً همان تصویری که در آنالایزر تصویری مشاهده می‌شود، قابل شناسایی و آنالیز است. لذا باید برای هر نوع اسپرم از پستانداران مختلف، یک تنظیم صحیح، شناسایی و انجام شود. در این ارتباط شکل سر اسپرم، شکل دم اسپرم و اندازه‌ اسپرم و ضمائمی نظیر قطره سیتوپلاسمی، باید در نظر گرفته شود. این بررسیها با عدسی شیئی 4 و 10 فاز کنتراست بالا و منفی نیکون صورت پذیرفت. استفاده از این نوع اپتیک موجب ایجاد بهترین کنتراست برای سر اسپرم جوندگان (که داس مانند است) می‌شود. بخصوص زمانی که اسپرمها ضمن حرکت پیشرونده خود، بدون هیچگونه مانعی در حال چرخش هستند. این موضوع از این جهت قابل اهمیت است، که تحت حالت فاز کنتراست نرمال، سرهای اسپرم جوندگان، ضمن حرکت پیشرونده و در حال چرخش، بصورت متناوب روشن و تیره می‌شوند. این امر منجر به قطع ردیابی حرکت اسپرم توسط آنالایزرهای حرکتی اسپرم می‌شود. بهترین و مناسب‌ترین تنظیم در این آنالایزر (HST=Hobson Sperm Tracker) براساس استفاده از دستورالعمل ارائه شده توسط تولید کننده دستگاه و با تکرار آنالیزهای انجام شده از روی نوار ضبط شده ویدئویی حرکت اسپرم تعیین گردید. تنظیمها برای آنالیز تصویری عدسی شیئی 10 براساس ذیل بود: Search radius=15.31m, predict=off, video= pal, aspect=1049, refresh time=1 second, threshold= 20/-66 و filter weighting 1=-2,2= 4,3=3,4=4. آنالایزر Hobson Sperm Tracker می‌تواند تصاویر مورد نظر را بمیزان 25، 30 و یا 60 تصویر در هر ثانیه گرفته و مورد آنالیز قرار دهد. در این مطالعه 25 تصویر در هر ثانیه مورد استفاده جهت آنالیز اسپرم قرار گرفت. برتری قابل ذکر در این آنالایزر در مقابل با CASA سیستم‌های دیگر این است که در آنالایزرهای دیگر، میدان دید مورد مشاهده تنها در زمان بسیار کوتاهی (کمتر از یک ثانیه) مورد مطالعه قرار می‌گیرد در حالیکه این آنالایزر (HST) قادر به آنالیز حرکتی میدان دید مورد مشاهده در زمان تنظیم شده و قابل کنترل بین 15 ثانیه (با قابلیت اندازه‌گیری ردیابی صدها اسپرم) تا 5 دقیقه (ردیابی هزاران هزار اسپرم) را دارد. ردیابی دقیق بوسیله یک امکان نصب شده بر روی این آنالایز، تحت عنوان trail draw انجام می‌پذیرد. در بهترین شکل تنظیم، صفحه مونیتور آنالایزر قادر است همزمان در حدود 200 اسپرم را آنالیز و بررسی نماید. معمولاً در غلظت تهیه شده 1061/0 اسپرم در هر میلی‌لیتر، فقط 80-50 اسپرم متحرک در هر مشاهده با یک عدسی شیئی 10 قابل رؤیت است. لذا این دستگاه با این تنظیم، قادر به مطالعه تعداد قابل توجهی اسپرم خواهد بود. آنالایزر HST همچنین قادر است که پارامترهای متعدد حرکتی اسپرم را اندازه‌گیری نماید. (Curvilinear velocity) VCL (مجموع فواصل پیموده شده در مسیر عبور در هر تصویر تقسیم بر مجموع زمان ردیابی). VAP (Velocity Average Path)، (راه پیموده شده براساس معدل تعداد نقطه‌های بدست آمده در مسیر حرکت، تقسیم بر زمان ردیابی)، VSL (Velocity Straight Line) (فاصله مستقیم بین مسیر پیموده شده در هر ردیابی، تقسیم بر زمان هر ردیابی)، MAD (Mean Angular Displacement) معدل تغییر جهت سر اسپرم در هر تصویر)، BCF (Beat Cross Frequency)، (نقاط چرخش سر اسپرم)، LHD (Lateral Head Displacement) (معدل انحراف سر اسپرم از یک مسیر مستقیم) و Linearity LIN (فاصله خط مستقیم مسیرهای پیموده شده تقسیم بر مجموع فواصل مسیرهای پیموده شده 100). علاوه بر آن میزان اسپرم‌های متحرک، غلظت و میزان درصد اسپرم‌های متحرک نیز قابل اندازه‌گیری است. در این مطالعه فقط اندازه‌های اصلی تحرک اسپرم (VAP, VSL, VCL) مورد آنالیز و بررسی قرار گرفت. آنالیز تصویری از حرکت اسپرم حرکت اسپرم بطور جزئی‌تر و دقیق‌تر و بصورت تصویر به تصویر، توسط آنالیزر تصویری و از طریق نوار ضبط شده حرکت اسپرم، تصویربرداری گردید. این تصویرها بوسیله تسهیلات موجود در انتخاب تصویر (Improvision Ltd.) و نرم افزار آنالایزر تصویری (NIH, Washington, USA) 52/1 انجام شد. با انتخاب حداقل 10 تصویر برای هر اسپرم، حرکت واقعی هر اسپرم در مراحل مختلف بلوغ، بصورت تصویری بدست آمد. نتیجه این آزمایش قابل مقایسه با ردیابی انجام شده در مرحله قبلی آزمایش (trail draw) توسط CASA می‌باشد. حرکت اسپرم رت در روند بلوغ خارج از بدن انکوباسیون اسپرم روی کشت سلول‌های اپیدیدیم اسپرم ناحیه انتهایی caput و ناحیه ابتدایی Corpus اپیدیدیم رت براساس آنچه در بالا توضیح داده شد، تهیه گردید. اسپرمها بمیزان 1055 در هر میلی لیتر به مدت 24 ساعت براساس سه الگوی ذیل انکوبه شدند. الف) بطور مستقیم بر روی سلول‌های کشت داده شده اپیدیدیم. ب) داخل محیط کشت برداشته شده از کشت سلول‌های اپیدیدیم پس از 24 ساعت ج) داخل محیط کشت آنالیز حرکت اسپرم، در مدت انجام کشت همزمان (انکوباسیون) اسپرم با سلول‌های اپیتلیال اسپرم استفاده شده در آزمایشات فوق، توسط CASA و براساس زیر آنالیز شد: الف) همزمان با شروع انکوباسیون ب) 5/4 ساعت پس از انکوباسیون ج) 24 ساعت پس از انکوباسیون. از آنجا که بررسی حرکتی اسپرم توسط CASA در حضور سلول‌های اپیتلیال امکان پذیر نبود، لذا برای رفع این مشکل، بمیزان 30 میکرولیتر از سوسپانسیون محیط کشت حاوی اسپرم به یک پتری دیش کوچک مشابه آنچه قبلاً توضیح داده شده بود، منتقل و آنالیز انجام پذیرفت. نمایش ردیابی حرکت اسپرم در روند انجام هم کشتی همزمان با انجام آنالیز حرکتی اسپرم توسط CASA، نمایش ردیابی حرکت اسپرم بوسیله trail draw بدست آمد. این نمایش ترسیم کننده حرکت حداقل یک اسپرم در نواحی مزبور در روند آزمایش بود. محاسبات آماری اطلاعات بدست آمده به برنامه نرم افزاری آماری، (Fig. P. Software Corporation, Scientifi Figure Processor, Durham, N.C., USA) منتقل و سپس محاسبات آماری انجام گردید. محاسبات آماری برای هر کدام از پارامترهای حرکتی اسپرم (VCL, VAP, VSL) بصورت test "t" Paired انجام شد. نتایج حرکت اسپرم رت در روند بلوغ داخل بدن آنالیز اسپرم توسط تکنیک قطره‌ای (droplet Method): بررسی و آنالیز اسپرم از نواحی مختلف اپیدیدیم براساس آنچه توضیح داده شد، برای شش رت انجام شد. نمونه‌های برداشته شده از نواحی caput با توجه به زمان حرکت محدود اسپرم در آن ناحیه و فرصت بسیار کوتاه جهت بررسی حداقل 12 بار آنالیز شد، در حالیکه نمونه‌های برداشت شده از نواحی corpus و cauda حداقل 18 مرتبه آزمایش شد. معدل (mean) مربوط به حرکت پیشرونده اسپرم (VCL, VAP, VSL) از نواحی مختلف اپیدیدیم در شکل شماره 1 نمایش داده شده است. آنالیز اسپرم توسط تکنیک لام و لامل (Coverslip method) بررسی و آنالیز اسپرم از نواحی مختلف اپیدیدیم بر روی 6 رت انجام شد، همچنین 6 آنالیز از اسپرم انزال شده نیز مورد بررسی و آنالیز قرار گرفت. معدل (mean) مربوط به حرکت پیشرونده اسپرم (VCL, VAP, VSL) مربوط به نواحی مختلف اپیدیدیم و همچنین اسپرم انزال شده در شکل شماره 2 نمایش داده شده است. پارامترهای حرکتی اسپرم براساس آنالیز با trail draw بوسیله استفاده از امکان ثبت و مشاهده حرکت اسپرم trail draw بر روی HST، نمایش ردیابی حرکتی اسپرم نواحی مختلف اپیدیدیم و پس از انزال در شکل 3 تهیه شد. این ردیابی انعکاس معدل اطلاعات حرکتی اسپرم ارائه شده در شکل 1 و 2 می‌باشد. اسپرم ناحیه ابتدایی اپیدیدیم (initial segment)، حرکت پیشرونده بسیار کمی داشت. اسپرم‌های برداشته شده از ناحیه ابتدایی و انتهایی Caput، دارای حرکت تاژکی دم، بشکل پهن آن بودند. این نوع حرکت دم منجر به حرکت پیشرونده بسیار ناچیزی برای اسپرم می‌باشد. اسپرم براشت شده از ناحیه اولیه corpus، دارای حرکت دورانی بودند. تغییر این حرکت به سمت حرکت مستقیم و پیشرونده در اسپرم نواحی انتهایی corpus، با کاهش پهنای حرکت تاژکی دم دیده می‌شود. اسپرم ناحیه اولیه cauda نمایش حرکتی پیشرونده کاملتری از اسپرم برداشت شده از ناحیه انتهایی cauda داشت. ولی پس از انزال، اسپرم نمایش حرکت پیشرونده کاملتری از همه نواحی اپیدیدیم داشت. پارامترهای حرکتی اسپرم براساس آنالیز با برنامه کامپیوتری 52/1 Image با این روش، پارامترهای حرکتی اسپرم از هر ناحیه از اپیدیدیم با استفاده از انتخاب تصاویر متناوب و منظم از فیلم ویدئویی حرکت اسپرم، بصورت انیمیشن برای مشاهده و همچنین امکان چاپ و نمایش تصویری بررسی و تهیه شد. تصاویر اسپرم از ناحیه انتهایی caput، ابتدایی و انتهایی corpus و همچنین از ناحیه انتهایی cauda در شکل 4 الی 7 بترتیب نمایش داده شده است. این اشکال و تصاویر بیانگر وجود تغییرات اساسی در حرکت اسپرم رت و در روند بلوغ آن در اپیدیدیم می‌باشد. اسپرم ناحیه انتهایی caput (شکل 4) دارای حرکت پهن و کمانی زدن دم از ناحیه قسمت میانی دم بود. این نوع حرکت دم، موجب حرکت بسیار کم پیشرونده و پیشرفت کم سر اسپر به سمت جلو در مقایسه تصویر 1 الی 16 بود. اسپرم ناحیه ابتدایی corpus، حتی بیش از ناحیه انتهایی caput دارای حرکت پهن زدن دم ولی بصورت سریعتر بود، که منجر به داشتن حرکت دورانی میشد (تصویر 1 الی 28 شکل5). ولی تغییرات مشخصی در پارامترهای حرکتی اسپرم در ناحیه انتهایی corpus (تصویر 1 الی 14 شکل 6) بوجود می‌آید. این تغییرات نشان دهنده انعطاف کمتر تاژک در ایجاد حرکت پهن بود، این مساله می‌تواند بواسطه استحکام بیشتر دم اسپرم در این ناحیه باشد. این نوع حرکت دم، موجب افزایش حرکت پیشرونده اسپرم در ناحیه انتهایی cauda شده است (تصویر 1 الی 16 شکل7)، که گرفتن و نمایش تصویر این ناحیه بواسطه سرعت زیاد حرکت اسپرم بسیار مشکلتر از نواحی دیگر اپیدیدیم بود. حرکت اسپرم رت در روند بلوغ آزمایشگاهی آنالیز حرکتی اسپرم در مدت انکوباسیون بر روی سلول‌های اپیتلیال اپیدیدیم: اپیتلیال اپیدیدیم ناحیه caput و corpus براساس روش مندرج در مقاله (1). بمدت 3 روز کشت داده شد. اسپرم‌های تهیه شده از نواحی مختلف اپیدیدیم جهت بررسی تأثیر هم کشتی اسپرم بر بلوغ آزمایشگاهی آن، مورد استفاده قرار گرفت. اسپرم ناحیه انتهایی و ناحیه ابتدایی corpus بر روی کشت‌های اپیدیدیم فوق کشت داده شد و همزمان آزمایشات مشابهی با انکوباسیون اسپرم نواحی فوق در محیط کشت برداشته شده از کشت سلول‌های اپیتلیوم اپیدیدیم پس از 24 ساعت از کشت (Conditioned medium) و محیط کشت به تنهایی انجام شد. حرکت اسپرم ناحیه انتهایی caput و ناحیه ابتدایی corpus با اندازه گیری بوسیله CASA در آماده سازی‌های متعدد در شکل 8 و 9 بترتیب ارائه شده است. اسپرم ناحیه انتهایی Caput در حضور کشت اپیتلیال اپیدیدیم، بمیزان قابل توجهی افزایش حرکت را در مدت انکوباسیون از خود نشان داد. در حالیکه در conditioned medium، اسپرم ناحیه انتهایی Caput، تنها حرکات ابتدایی را در مدت انکوباسیون از خود نشان داد و جالب توجه اینکه همین اسپرم در محیط کشت معمولی، پس از انکوباسیون بدون حرکت بود. مشاهدات بر روی هم کشتی اسپرم ناحیه ابتدایی corpus تقریباً مشابه آنچه در قسمت انتهایی caput گفته شد، بود. ولی تنها تغییرات حرکتی اسپرم در این ناحیه و در مجاورت کشت سلول‌های اپیتلیال، بسیار بهتر از ناحیه انتهایی caput بود. بحث در این مطالعه از یک سیستم جدید CASA، برای نمایش تغییرات حرکت اسپرم، همزمان با بلوغ آن در داخل بدن، در اپیدیدیم و پس از بلوغ و انزال و همچنین همزمان با بلوغ آن در آزمایشگاه با انکوباسیون بر روی سلول‌های اپیتلیال اپیدیدیم و محیط کشت، استفاده شد. این نکته پذیرفته شده و بدیهی است که نتایج بدست آمده توسط CASA، بستگی به چگونگی تنظیم الکترونیکی آن دارد (13) و لذا می‌تواند تأثیر مشخصی را بر نتایج آنالیز بگذارد. این تنظیم الکترونیکی، مشخص کننده این مطلب است که، آیا اسپرم بخوبی توسط CASA شناسایی شده است؟ اینکه چگونه اسپرم بعنوان یک متحرک توسط CASA تشخیص داده می‌شود؟ و اینکه آیا تنظیم دقیق جهت ردیابی پارامترهای مختلف حرکتی اسپرم صورت گرفته است؟ این تنظیم الکترونیکی براساس پارامترهای عملکردی انواع مختلف CASA، متنوع و همچنین بستگی به نوع اسپرم حیوانی دارد که مورد آنالیز قرار می‌گیرد. در حال حاضر سیستم‌های متنوعی از CASA در حال ارزشیابی هستند. استراتژی مشخصی که برای ردیابی اسپرم توسط CASA استفاده می‌شود، متنوع و بستگی به امکانات و توانایی‌های استفاده ساختمانی آن دستگاه‌ها دارد. برای HST، تنظیم دقیق براساس ردیابی بدون انقطاع اسپرم و همچنین عدم تداخل ردیابی حرکت دو اسپرم، صورت می‌پذیرد. در CASA معمولاً بطور طبیعی از برخورد تابش نور بر سر قرینه اسپرم و با موقعیت فاز کنتراست میکروسکوپ، استفاده می‌شود. مشکل وقتی ایجاد می‌شود که اسپرم، با سر غیر قرینه، نظیر اسپرم رت مورد بررسی قرار می‌گیرد. علاوه بر آن، قطره سیتوپلاسمی که معمولاً در اسپرم‌های نوحی ابتدایی اپیدیدیم و قبل از بلوغ کامل اسپرم و در کنار سر اسپرم دیده می‌شود، منجر به ارائه نتایج غیر واقعی می‌گردد. ولی با (Hobson Sperm Trachor)HST، امکان فائق آمدن بر این مشکلات، با تنظیم دقیق آستانه وجود دارد. حرکت اسپرم به عمق نمونه تهیه شده نیز بستگی دارد (11). اگر خیلی عمیق باشد، حرکت تاژک اسپرم تغییر نموده و اسپرم در ابعاد مختلف حرکت می‌نماید ولی وقتی که اسپرم در بین لام و لامل و با عمق تقریبی m60 و در زیر روغن قرار گیرد، این عمق احتمالاً برای حرکت آزاد اسپرم بمدت نسبتاً طولانی کافی به نظر می‌رسد. اگرچه مقادیر حرکتی بطور محسوسی در اسپرم موجود در قطره محیط کشت (droplet) که عمق آن بیش از m200 است، افزایش می‌یابد. این موضوع ممکن است بیانگر این مطلب باشد که روش لام و لامل (coverslip) موجب محدود نمودن حرکت اسپرم می‌شود. اگرچه فاکتورهای دیگری نظیر تبادلات گازی نیز ممکن است بر تحرک اسپرم اثر گذارد. آنالیز تصویری با استفاده از trail draw و نرم افزارهای تصویری مورد استفاده در این بررسی بیانگر این مطلب است، که بلوغ حرکتی اسپرم اپیدیدیم رت در سه فاز مختلف صورت می‌پذیرد. فاز اول از ناحیه ابتدایی اپیدیدیم (Initial segment) تا ناحیه انتهایی caput، که اسپرم حرکت تنظیم نشده و غیر متقارن تاژک را بدست می‌آورد. و این یک حرکت غیر پیشرونده و با زدن دم در پهنای وسیع آن است. فاز دوم از ابتدای ناحیه corpus، و این فاز، بوسیله حرکت کاملاً دایره‌ای اسپرم شناخته شده است. این حرکت انعکاس حرکت ناقص تاژک در قسمت انتهایی دم است. حرکت دایره‌ای اسپرم برای عبور از ناحیه اتصال رحم به لوله‌ها، در اسپرم رت (8) و اسپرم هامستر (12)، کافی بنظر نمی‌رسد. فاز سوم بوسیله افزایش حرکت پیشرونده اسپرم و شروع آن از اسپرم‌های ناحیه انتهایی corpus مشاهده می‌شود. تغییرات ناشی از استحکام و سختی تاژک در اسپرم‌های این ناحیه، احتمالاً مربوط به اکسیداسیون پل‌های دی سولفید، در قسمت انتهایی فیبرها است. این تغییر می‌تواند زمینه حرکت پیشرونده را همچنانکه در هامستر نیز مشاهده شده است (6 و 23)، فراهم آورد. حرکت پیشرونده می‌تواند زمینه عبور اسپرم را از اتصال رحم به لوله‌ها و نفوذ اسپرم در زوناپلوسیدا و اتصال اسپرم با ویتلوس را (22)، فراهم آورد. مطالعات دیگر نیز نشان داده است که قدرت باروری اسپرم رت در آزمایشگاه بستگی مستقیمی به VSL دارد (16). توجه به این نکته بسیار جالب و با اهمیت است که تغییرات در حرکت اسپرم اپیدیدیم و بلوغ آن، نیز می‌تواند در آزمایشگاه انجام شود، و آن وقتی است که اسپرم اپیدیدیم در مجاورت کشت اپیتلیال اپیدیدیم قرار گیرد (2). مطالعات نشان داد که باقی ماندن اسپرم در قسمت اولیه اپیدیدیم بدلایل انسدادی، نتوانسته است موجب افزایش حرکت پیشرونده اسپرم شود. این نکته بیانگر این مطلب است که فاکتورهای مربوط به اپیتلیوم اپیدیدیم برای بلوغ اسپرم بسیار با اهمیت هستند. این ایده همچنین با انجام هم کشتی اسپرم هامستر با سلول‌های اپیتلیال اپیدیدیم، که نتایج مفیدی بر بلوغ حرکتی اسپرم و زنده ماندن آن در آزمایشگاه داشته‌اند، نشان داده شده است، محیط کشت برداشته شده از کشت سلول‌های اپیتلیال اپیدیدیم (conditioned medium) نیز برای این بلوغ مفید است و نشان دهنده این مطلب است که ترشحات اپیتلیال اپیدیدیم مسئول تأثیرات این بلوغ اسپرم هستند (16). محیط کشت به تنهایی هیچ تأثیری بر بلوغ حرکتی اسپرم نداشته و حتی امکان زنده نگه داشتن اسپرم اپیدیدیم را در مدت زمان مشابه هم کشتی‌های فوق نداشته است. 2 <p>Introduction: When mammalian spermatozoa first enter the epididymis from testis they display little or no progressive motility. On transit along the epididymis, spermatozoa gradually acquire the potential for full progressive motility. This process which begins after sperm leave the testis, is called sperm maturation and requires specific factors from the epididymal epithelium. The aim of this study was to investigate the use of computer-assisted sperm analysis for the objective determination of rat sperm motility. Having validated this system, it would be used to assess in vitro and in vivo sperm maturation.Material and methods: Sperm samples from various regions of the epididymis and ejaculates, were prepared. Primary cultures of the epithelium from the rat epididymis were established. A novel computer-aided sperm analysis was used to analyze and characterize the motility of the rat spermatozoa during in vitro and in vivo maturation. Sperm motility analysis also examined during co-culture. Image analyses of sperm movement from video recording tapes were also examined. Results: This study used a novel CASA system and image analysis to monitor the changes in motility as spermatozoa undergo maturation in the rat epididymis, during ejaculation and during co-incubation with epididymal epithelial cultures and medium preparations. It is interesting to note that changes in epididymal sperm motility were occurred in vivo and in vitro. The co-incubation of immature rat spermatozoa from the caput epididymis with epithelial cultures led to significant changes in progressive sperm motility parameters associated with maturation.Conclusion: This study indicate the CASA and other image analysis techniques, were able to characterize in detail the objective determination and changes in motility parameters of rat spermatozoa. Validation of this system provides the best facility to assess rat sperm maturation in vitro.</p> 11 24 Mohammad Mehdi MM Akhondi محمدمهدی آخوندی Reproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR Reproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR Iran Hari H Moore هری مور University of Sheffield University of Sheffield United Kingdom rat spermatozoaCASA systemimage analyzerepididymal sperm maturationin vitro sperm maturation 326.pdf Akhondi M, Chapple C, and Moore HDM. Prolonged survival of human spermatozoa when co-incubated with epididymal cell cultures. Human Reproduction. 1997;12:514-522.##Bedford JM. Effects of duct ligation on the fertilizing ability of spermatozoa from different regions of the rabbit epididymis. Journal of Experimental Zoology. 1967;166: 271-282.##Bedford JM, and Yanagimachi R. Initiation of sperm motility after mating in the rat and hamster. Journal of Andrology. 1992;13:444-9.##Chapin RE. Methods for assessing rat sperm motility. Reproductive Toxicology. 1992;6:267-273.##Cooper TG. The epididymis, sperm maturation and fertilization. 1986; (Heidelberg: Springer-Verlag).##Cornwall GA. Induction and enhancement of progressive motility in hamster caput epididymal spermatozoa. Biology of Reproduction. 1986;35:1065-1074.##Dostal LA, Faber CK, Zandee Sperm motion parameters in vas deferens and cauda epididymal rat sperm. J Reprod Toxicol. 1996;10(3):231-5.##Gaddum-Rosse P. Some observations on sperm transport through the uterotubal junction of the rat American Journal of Andrology. 1981;160:333-341.##Hinton BT. Measurement of the motility of rat spermatozoa collected by micropuncture from the testis and from different regions along the epididymis. Journal of Reproduction and Fertility. 1979;55:167-172.##Holt WV. The value of sperm swimming speed measurements in assessing the fertility of human frozen semen. Human Reproduction. 1988;4:292-297.##Katz DF, Davis RO. Automatic analysis of human sperm motion. Journal of Andrology. 1987;8:170-181.##Kann ML, Raynaud F. In vitro fertilization after initiation of sperm motility in the hamster- epididymis. Reproduction, Nutrition and Development. 1982;22:455-463.##Knuth UA. Computerized semen analysis: Objective measurement of semen characteristics is biased by subjective parameter setting. Fertility and Sterility. 1987;48:118-124.##Moore HDM. The epididymis. In Scientific Foundation of Urology, GD. Chisholm and WR. Fair, eds. London: (Heinemann). 1990;pp:399-410.##Moore HDM, Akhondi MA. Fertilizing capacity of rat spermatozoa is correlated with decline in straight-line velocity measured by continuous computer-aided sperm analysis: Epididymal rat spermatozoa from the proximal cauda have a greater fertilizing capacity in vitro than those from the distal cauda or vas deferens. Jouranl of Andrology. 1996;17(1):50-60.##Moore HDM, Akhondi MA. The in vitro maturation of mammalian spermatozoa. In Reviews of Reproduction. 1996.##Slott VL, Suarez JD, Poss PM, Linder RE, Strader LF, Perreault SD. Optimization of the Hamilton- Thorn computerized sperm motility analysis system for use with rat spermatozoa in toxicologycial studies Fundam Appl Toxicol. 1993;21(3):298-307.##Slott VL, Suarez JD, Perreault SD. Rat sperm motility analysis: methodologic considerations Reprod Toxicol. 1991;5(5):449-58.##Toth GP, Stober JA, Zenick H, Read EJ, Christ SA, Smith MK. Correlation of sperm motion parameters with fertility in rats treated subchronically with epichlorohydrin Journal Androl. 1991;12(1):54-61.##Turner, TT, Giles RD. The effects of carnitine, glycerylphosphorylcholine, caffeine and egg yolk on the motility of rat epididymal spermatozoa. Gamete Research. 1981;4:283-295.##Yeung CH. Characterization of the motility of maturing rat spermatozoa by computer-aided objective measurement. Journal of Reproduction and Fertility. 1992;96:427-41.##Yanagimachi R. Mammalian fertilization. In the physiology of Reproduction, E. Knobil and JD. Neill, eds (New York: (Raven Press). 1994;pp:189-317.##Yeung CH. Maturation of hamster epididymal sperm motility and influence of the thiol status of hamster and rat spermatozoa on their motility patterns. Molecular Reproduction and Development. 1994.##

Infections in Recurrent Miscarriage 2 1 مقدمه منظور از سقط، دفع محصولات حاملگی قبل از هفته بیستم حاملگی است (1). البته تعاریف مختلفی در مکاتب دیگر از سقط مطرح شده است. یکی از این موارد Pregnancy Loss است، که زمان دفع جنین را تا هفته 24 و حتی 28 حاملگی هم اطلاع می‌کنند و با چنین توجیهی عنوان Pregnancy Loss صحیح بنظر خواهد رسید و دیگر Abortion صادق نخواهد بود (2). لازم بذکر است که گرچه رخداد سقط خود می‌تواند یک پدیده مفید در جلوگیری از تولد نوزادان ناهنجار و مشکلات دیگر بوده و بالقوه مفید باشد، اما اگر بیش از 2 یا 3 بار متوالی تکرار گردد جنبه پاتولوژیک پیدا نموده و تحت عنوان سقط مکرر Recurrent Pregnancy loss (PRL) نامیده می‌شود و نیازمند بررسی و درمان مناسب خواهد بود. سقط مکرر یکی از مشکلات عمده بیماران است و حدود 1-3/0 درصد از زنان حامله را به خود اختصاص می‌دهد (3). بررسی و پیگیری علت سقط را معمولاً پس از 3 بار سقط آغاز می‌نمایند ولی در برخی شرایط از جمله بیماری‌های زمینه‌ای، عفونت‌های مزمن، سن بالای زن و ... لازم است حتی پس از 2 بار سقط اقدامات تشخیصی را شروع نمود (3). اتیولوژی سقط مکرر اتیولوژی‌های مختلفی برای سقط مکرر مطرح گردیده است. همچنان که در جدول شماره 1 مشاهده می‌گردد، در منابع علمی قبلی زنان و زایمان حدود 5% از موارد را به علل عفونی اختصاص می‌داد. در حالیکه با پیشرفت تکنولوژی و تحقیقات گسترده مشخص گردید که گرچه عوامل عفونی می‌توانند نقشی در بروز سقط منفرد خودبخودی ایفا نمایند. ولی دیگر سهمی را برای آن در بیان علل سقط مکرر قائل نشده‌اند (جدول شماره 2). بهرحال، در بررسی یک بیمار مبتلا به سقط مکرر می‌بایستی تمام بیماری‌های احتمالی را در نظر گرفته و با انجام تست‌های تشخیصی آنها را به تأیید رسانیده و راهکارهای مفید را در درمان آن بکار گرفت. با توجه به آمار ارائه شده حدود 5% از علل سقط را عوامل عفونی به خود اختصاص می‌دهد. نتایج موجود دخالت ارگانیسم‌های غیر ویروسی را در ایجاد سقط‌های مکرر بعلت ایجاد عفونت مزمن یا راجعه دستگاه تولید مثل مادر تأیید می‌کند. بهرحال به اعتقاد دانشمندان دو دلیل عمده در تأیید برخی ازمیکروارگانیسمها در این موضوع دخالت دارد که عبارتند از رشد همان میکروارگانیسم از محصولات حاملگی بدست آمده از سقط و دیگری بهبود پیش آگهی حاملگی بدنبال درمان خاص آن عفونت است (4). علیرغم در دسترس بودن اطلاعات فوق، هنوز هم می‌بایستی مطالعات گسترده‌تر و دوسوکور (Double blind) با گروه کنترل در این زمینه انجام گیرد تا یافته‌های فوق تأیید شود. هماهنگونه که ذکر گردید عفونت یکی از علل مؤثر در سقط خودبخودی (Spontaneous Abortion) است. طبق آمار ارائه شده، سقط مکرر ناشی از عفونت از شیوع کمتری برخوردار است و این مسئله که عوامل عفونی می‌تواند یکی از علل RPL باشد مورد بحث است (5). مشاهدات مختلف مؤید آن است که فاکتورهای عفونی و مادری تؤام موجب بروز سقط راجعه می‌شوند. حساسیت سیستم ایمنی مادر به عفونت‌های مزمن نقش مهمی را در بیماران ایفا می‌نماید. فاکتورهای حساس کننده که اجازه بروز عفونت‌های شدید را می‌دهد از جمله اختلال سیستم ایمنی از شیوع کمی در جمعیت عادی زنان حامله برخوردار است. فاکتورهای دخیل در بروز سقط (6) عبارت است از: 1- تماس اولیه با میکروارگانیسم در ابتدای حاملگی. 2- توانایی میکروارگانیسم در ایجاد عفونت جفت. 3- ایجاد یک حالت ناقل بنحوی که عامل عفونی از جفت عبور و به جنین منتقل گردد. 4- اختلال در سیستم ایمنی در اثر استفاده از داروهای ایمونوساپرسیو، شیمی درمانی، کورتیکوستروئید یا بیماری ایدز. یک عامل عفونی برای اینکه بتواند موجب چندین بار سقط گردد باید معیارهای زیر را داشته باشد (7): 1- این ارگانیسمها بایستی برای حداقل یک تا چند سال در بدن وجود داشته باشند، به عبارت دیگر عفونت باید مزمن باشد. 2- کولونیزاسیون میکروب نباید بقدری شدید باشد که مانع تخمک‌گذاری و فعالیت جنسی گردد. 3- ارگانیسم باید بافت‌های حاملگی مانند (دسیدوا، تروفوبلاست، جنین) را درگیر کند و یا به احتمال دیگر باید اثرات سیستمیک زیادی داشته باشد تا بتواند بطور مستقیم بر روی رحم و بافت‌های حاملگی تأثیر بگذارد. از آنجایی که هیچیک از عوامل عفونی هر سه معیار فوق را ندارند، هیچکدام از آنها نمی‌توانند علت ثابت شده RPL باشند. بنابراین در شرایط عادی و در بررسی‌های ابتدایی لزومی به انجام آزمایشات تشخیصی عفونت وجود ندارد و تنها بایستی آن را به عنوان یک عامل همیشه در نظر داشته و با توجه به احتمال بروز خطر در بیماران این اقدامات برای آنها انجام گیرد. بهرحال گزارشات مختلف در مورد بیماری و شواهد محیطی نشان می‌دهد که چند عامل عفونی مختلف نقش مهمتری را در بروز RPL دارند. فیزیوپاتولوژی سقط‌های عفونی سقط عفونی بدلایل مختلف زیر ایجاد می‌شود (3): تولید مواد توکسیک: وجود باکتری ناشی از عفونت و همچنین تولید اندوتوکسین و اگزوتوکسین میکروارگانیسمها موجب تأثیر سوء روی جنین و جفت شده منجر به مرگ و سقط جنین می‌شود. ستوکینها: فعال شدن سلول‌های ایمنی و التهابی موجب ترشح سیتوکین‌هایی با قابلیت توکسیک فراوان شده و منجر به آزاد شدن پروستاگلاندینها گردیده و بر روی اندومتر و واحد جفتی‌ـ جنینی موثر است. در این زمینه Soluble Immune Factors مثل سیتوکین‌های التهابی از جمله اینترلوکین 1- بتا، اینترلوکین-6 و TNF- در سلول‌های تروفوبلاست جفت خانم‌هایی که سقط می‌کنند افزایش می‌یابد (8). تولید مواد متابولیک: میکروارگانیسمها برخی امینها و پروتئازها را تولید می‌کنند که با تأثیر بر روی آمنیون و جفت ایجاد آمنیونیت و التهاب نموده و در نتیجه منجر به پارگی زودرس کیسه آب می‌شوند. ایمونولوژیک: آنتی‌بادی‌های ایجاد شده بر علیه میکروارگانیسمها با بافت جنین و جفت واکنش متقاطع داشته و با اتصال به آن در روند طبیعی حاملگی تداخل ایجاد می‌کنند. عفونت جفت: موجب اختلال در واحد جفتی‌ـ جنینی و عدم خونرسانی خوب به پلاسنتا شده و در نهایت منجر به مرگ جنین (fetal death) می‌شود. اندومتریت: ناشی از عفونت یا ترشح سیتوکینها، تولید محصولات اصلی از اندومتر را مهار نموده و پروتئین‌های لازم جهت لانه‌گزینی مناسب مثل PP14 کاهش می‌یابد. همچنین موجب کاهش بروز رسپتورهای پروژسترون در سطح اندومتر می‌گردد (7). متأسفانه هنوز هم مشاهده می‌شود که بسیاری از همکاران با مواجه شدن با موارد سقط راجعه آزمایشات عفونی را در صدر آزمایشات درخواستی خود قرار می‌دهند، در صورتیکه فقط در برخی شرایط خاص مثل عفونت سیتومگالوویروس است که می‌تواند در سه ماهه اول حاملگی فعال شده و با توجه به تراتوژنیستی بالای خود موجب سقط راجعه شود. علل میکروبی سقط مکرر سیفلیس (Syphilis): تریپونماپالیدوم عامل بیماری سیفلیس است که توانسته‌اند آن را از بافت‌های جنینی و جفتی سقط‌های سه ماهه اول جدا کنند ولی چون شیوع خود بیماری سیفلیس زیاد نیست، بنظر نمی‌رسد که از علل RPL باشد. شواهد زیادی در دست است که نشان می‌دهد اسپیروکت ترپونما تا هفته 18 حاملگی قادر به عبور از سد جفتی نیست (1). بعلاوه سیستم ایمنی نوزاد از هفته 20 حاملگی تکمیل می‌شود و قبل از آن سیستم ایمنی آنقدر قدرت ندارد که پاسخ التهابی شدیدی را ایجاد نماید. در موارد ابتلا به سیفیلیس پس از هفته 20 حاملگی عامل عفونی باعث مرگ جنین می‌شود (6). از طرف دیگر شیوع سیفلیس بخصوص در کشور ما آنقدر کم است که حتی شاید نیازی به انجام آزمایش‌های تشخیصی سیفلیس نباشد. درمان سیفلیس استفاده از پنی‌سیلین واریترومایسین است. باکتریال واژینوزیس (Bacterial Vaginosis): عفونت‌های باکتریال واژن با تحریک موضعی و تولید آمینها و پروستاگلاندینها دسیدوا را تحریک نموده و موجب بروز عوارضی مثل سقط دیررس، پارگی زودرس کیسه آب، کوریوآمینونیت، اندومتریت پس از زایمان و زایمان زودرس می‌گردند. براحتی می‌توان با انجام کشت‌های میکروبی بیماری را شناسایی و درمان نمود تا از بروز و عوارض آن جلوگیری شود (9). در یک بررسی در بین 500 بیمار مبتلا به سقط راجعه و در افرادی که حداقل یک سقط دیررس داشته‌اند شیوع باکتریال واژینوزیس نسبت به افرادی که سقط زودرس داشته‌اند، دو برابر بوده است (10). با در نظر گرفتن این مسئله که باکتریال واژینوزیس یک بیماری غیر التهابی است، مطالعات نشان داده است که آنتی‌بیوتیک موضعی و واژینال نسبت به مصرف دارو از طریق خوراکی تأثیر کمتری داشته و مؤید آن است که واژینوز باکتریال فقط نشانه‌ای از عفونت واضح دستگاه تولید مثل بوده و محدوده ابتلا آن بیش از تأثیر آنتی‌بیوتیک موضعی است، بحدی که حتی گزارش شده است که آنتی‌فسفولیپید آنتی‌بادیها در حضور عفونتها مثل میکوپلاسما افزایش می‌یابد که می‌تواند خود موجب سقط راجعه شود (11). کلامیدیا تراکوماتیس (Chlamydia Trachomatis): عفونت مجاری دستگاه تناسلی مؤنث با کلامیدیا تراکوماتیس شایع‌ترین عفونت باکتریال بیماری‌های جنسی در ایالات متحده را تشکیل می‌دهد. از آنجایی که این ارگانیسم باعث عفونت مزمن می‌گردد می‌تواند در بروز RPL نقش داشته باشد (12). انجام آزمایشات سرولوژیکی می‌تواند از نظریه حمایت کند. در یک بررسی نمونه ادرار زنان قبل از هفته 22 حاملگی بوسیله (Polymerase Chain Reaction) PCR، DNA مورد بررسی قرار گرفته و مشخص شد که میزان کلامیدیا مثبت در افراد دچار سقط 3/8% و در گروه کنترل 8/5% بوده است که تفاوت چندانی با هم نداشته است (12). در حالیکه در چند بررسی دیگر که کلامیدیا را توانسته‌اند با روش PCR مشخص کنند، شیوع کلامیدیا در 42/2% گروه سقط کننده مثبت بوده که نسبت به گروه کنترل با اختلاف 01/0P< معنی‌دار است (13). همچنین در بررسی دیگری بر روی 365 بیمار که دارای سابقه بد حاملگی بوده‌اند در مقایسه با افراد گروه کنترل که حاملگی ترم داشته‌اند مشخص گردید که میزان آنتی‌ژن مثبت کلامیدیا که با روش PCR اندازه‌گیری گردیده است 28/2% و با 001/0P< معنی‌دار است (14). پس به نظر می‌رسد کلامیدیا می‌تواند نقش مهمی در این زمینه داشته باشد. در صورتیکه بررسی آزمایشگاهی قابل اطمینان بوده و نتایج منفی کاذب کمتر باشد، شیوع سقط‌های ناشی از کلامیدیا افزایش نشان خواهد داد. یکی دیگر از مکانیسم‌هایی که در پاتوژنز سقط در کلامیدیا مطرح می‌گردد اندومتریت ناشی از آن است که باعث کاهش تعداد رسپتورهای پروژسترون شده و در نتیجه از کفایت اثر آن می‌کاهد و موجب سقط می‌گردد. درمان کلامیدیا به کمک استفاده از اریترومایسین و یا داکسی سیکلین است. مصرف داکسی سیکلین در طی حاملگی ممنوع بوده و می‌بایست قبل از حاملگی مصرف شود. میکوپلاسماهومینیس (Mycoplasma Hominis): دو نوع از میکوپلاسماها یعنی میکوپلاسماهومینیس و اوروپلاسما اورولیتیکوم را می‌توان از مجاری تناسلی افراد بالغی که از نظر جنسی فعال هستند جدا نمود. با وجود اینکه واژن و اندوسرویکس از محل‌های شایع کولونیزاسیون این ارگانیسم می‌باشد، کولونیزاسیون عامل عفونی در قسمت‌های فوقانی دستگاه تناسلی هم به تأیید رسیده است (15). در مطالعه دیگری نشان داده شده که تقریباً یک سوم از 104 خانمی که دچار سقط سه ماهه دوم حاملگی شده‌اند از نظر میکوپلاسما مثبت بوده‌اند. Stary-Pedersen و همکارانش اولین افرادی بوده‌اند که ارتباط میکوپلاسما با RPL را با مشاهده 28% کولونیزاسیون اوروپلاسما اورولیتیکوم در اندومتر زنان مبتلا به PRL در مقابل 7% کولونیزاسیون مثبت در افراد گروه کنترل نشان دادند (01/0p<) (16). این در حالیست که میزان کولونیزاسیون اندوسرویکس در هر دو گروه تقریباً یکسان بوده و تفاوت محسوسی نداشته است. آمار ارائه شده نشان می‌دهد که گرچه کولونیزاسیون میکوپلاسما در اندوسرویکس زنان مبتلا به سقط خودبخودی 67%، تهدید به سقط 75% و حاملگی طبیعی 67% است و تفاوت چندانی ندارد، با اینحال سقط راجعه در مواردی اتفاق می‌افتد که اندومتر بیمار درگیر شده باشد (17). افراد با سابقه بد حاملگی از جمله سقط تحت پیگیری به کمک آزمایشات سرولوژی قرار گرفتند. در 27% از موارد lgG به روش ELISA مثبت بوده است که با 001/0P< نسبت به گروه کنترل معنی‌دار بوده است (18). بررسی‌های مختلفی در مورد اثرات در زنان آنتی‌بیوتیکی بر روی پیش آگهی حاملگی بعدی زنان دارای کشت مثبت میکوپلاسما انجام گرفته است (19). رژیم درمانی داکسی سیکلین قبل از حاملگی میزان سقط را از 96% به 47% می‌رساند، در حالیکه اگر درمان فقط در زنان حاملگی و با اریترومایسین انجام شود سقط را تا 20% کاهش می‌دهد. درمان توأم قبل و حین زایمان هم شیوع سقط را به 20% می‌رساند. پس می‌توان گفت که درمان در حین حاملگی از ارزش بالاتری برخوردار است. در بررسی که توسط Ren انجام گرفته است میزان شیوع اوروپلاسما اورولیتیکوم به روش PCR در حدود 3/33% بوده که نسبت به گروه کنترل با اختلاف 025/0 معنی‌دار خواهد بود (20). یکی از پیشنهادات این است که درمان تتراسیکلین قبل از حاملگی و اریترومایسین حین حاملگی انجام شود. توصیه دیگر اینکه مقداری از نمونه خارج شده در کورتاژ- آندومتر (D&C) به منظور بررسی تشخیص نارسائی فازلوتئال بهتر است جهت کشت میکوپلاسما ارسال نمود. لیستریامنوسیتوژن (Listeria monocytogen): باکتری گرم مثبت و استوانه‌ای شکل لیستریامنوسیتوژن یکی از علل شناخته شده ولی ناشایع در سقط زودرس انسان می‌باشد (21). این ارگانیسم تمایل خاص به جفت و جنین دارد و موجب سپتی سمی، پنومونی و مننژیت در نوزادان می‌گردد. مشخص‌ترین تابلوی بالینی آن کوریوآمنیونیت خفیف می‌باشد که موجب زایمان زودرس می‌گردد. این بیماری که معمولاً به شکل اپیدمی وجود دارد در بین بالغین کارگر غیر کشاورز و از طریق محصولات لبنیاتی منتقل می‌گردد. ارگانیسم از طریق انتقال جنسی منتشر شده و به اندوسرویکس و واژن منتقل می‌گردد. به اعتقاد عده‌ای از پزشکان زنان حامله حساسیت خاصی به عفونت لیستریوز دارند که بیشتر در سقط‌های منفرد دیده می‌شود (22). مواردی از لیستریا که باعث سقط خودبخودی سه ماهه اول و دوم شده است، نشان دهنده نقش احتمالی لیستریا در ایجاد RPL می‌باشد. محققین لیستریا را از سرویکس 25 مورد از 34 زنی که دچار RPL شده بودند جدا کردند ولی در هیچیک از 87 بیمار گروه کنترل نتوانستند ارگانیسم را جدا نمایند (23). امروزه بر روی درمان‌هایی از قبیل استفاده از پنی‌سیلین با دوز بالا و یاتری متوپریم‌ـ سولفامتوکسازول تأکید شده است. درمان‌های جایگزین دیگر آمپی سیلین به همراه جنتامایسین است. عفونت‌های ویروسی (Viral Infection): از عفونت‌های ویروسی می‌توان به سیتومگالوویروس، هرپس سیمپلکس و ویروسی که جدیداً تحقیقات زیادی روی آن انجام گرفته یعنی پاروویروس B19 اشاره نمود. از آنجائی که درمان خاصی برای عفونت‌های ویروسی وجود ندارد مشکلات بیشتری را بدنبال خواهد داشت. ویروس هرپس سیمپلکس (HSV): شواهد نشان می‌دهد که هرپس سیمپلکس می‌تواند موجب بروز سقط گردد. در دو مطالعه مختلف نقش HSV به اثبات رسیده است (24). یکی اینکه در یک بررسی گذشته‌نگر علائم عفونت HSV در زنانی که سابقه سقط قبلی داشته‌اند، خیلی بیشتر از افرادی بوده که سابقه سقط نداشته‌اند. در بررسی دوم رنگ آمیزی مثبت ایمونوهیستوشیمیایی اندومتر یا پرزهای جفتی زنان مبتلا به RPL از نظر HSV تفاوت آماری مشخصی را نشان نداده‌ است (25). از آنجایی که اندومتر فازلوتئال نسبت به فازفولیکولار در موارد بیشتری از نظر HSV مثبت بوده است، نشان می‌دهد HSV تحت کنترل هورمون‌های بدن فعال می‌شود. در حضور HSV در فازلوتئال، اندومتر کفایت لازم جهت لانه‌گزینی جنین را کسب نخواهد کرد (7). پس بایستی به منظور کشف ارتباط بین عفونت‌های ویروسی و RPL تحقیقات گسترده‌تر طراحی و بیشتر بر روی کشت متمرکز گردد زیرا Ab ضد ویروس‌های CMV و HSV در بسیاری از زنان مثبت است. سیتومگالوویروس (Cytomegalovirus): CMV یکی از عفونت‌های ویروسی است و این ویروس شایع‌ترین عامل مرگ داخل رحمی جنین می‌باشد و ویروس را می‌توان در ادرار و CSF کشت داد. سرولوژی هم می‌تواند وجود آنتی‌بادیها را نشان دهد. پاسخ ایمنی هومورال و سلولی به CMV در زنان مبتلا به سقط راجعه مورد بررسی قرار گرفته است. میزان Anti CMV-Anti bodies در زنان مبتلا به RPL بطور وضوح نسبت به شوهران خود با زنان گروه کنترل همسن بسیار کمتر است (26). کاهش میزان آنتی‌بادی بر علیه CMV ناشی از ضعف پاسخ Prolifrative Lymphocyte response به CMV در افراد سروپوزیتیو (Seropositive) مبتلا به RSA می‌باشد که نسبت به گروه کنترل بدون سابقه سقط و سروپوزیتیو بسیار ضعیف است و علت آن هنوز روشن نشده است (27). این مسئله از اهمیت بسزائی در افرادی که می‌خواهند تحت عمل لکوسیت‌ ترانسفیوژن ایمونوتراپی قرار بگیرند دارد، زیرا موجب فعال شدن مجدد (Reactivation) ویروس می‌گردد. البته نکته قابل اهمیت دیگر این است که آنتی‌ژنهای CMV بدو دسته تقسیم می‌شوند. یکی از آنها که نقش مهمتری را ایفا می‌کند Late antigen است. که از نیمه دوم حاملگی به بعد تظاهر پیدا می‌کند و به همین علت ممکن است علیرغم ابتلای بیمار تست‌های سرولوژیکی و تعیین آنتی‌ژن د نیمه اول حاملگی منفی باشد (28). این آنتی‌بادی که از نوع IgM بوده و بروش ELISA بررسی می‌گردد در دوران حاملگی از 64/4% به 92% در حین حاملگی می‌رسد (29). IgM در حین حاملگی افزایش می‌یابد و تا حدود 6-9 ماه پس از حاملگی هم بالا خواهد بود و نمی‌توان اختلافی بین عود بیماری از عفونت اولیه قائل شد (30،31). برخی از شرایط بیمار را مستعد عفونت CMV می‌کند. حاملگی در سن 22 سال یا کمتر، سن بالای 29 سال یا بیشتر وضعیت اقتصادی، سابقه سقط، شغل که بعنوان مثال IgM در پرستارها و تکنیسین‌های آزمایشگاه بالاتر است. از روش‌های مختلف آزمایشگاهی برای تشخیص آنتی‌بادی استفاده می‌کنند. گرچه قابلیت عفونت‌زائی این آنتی‌بادیها تحت تأثیر مواد دترژنت و انجماد کاهش می‌یابد ولی قدرت آنتی‌ژنی آنها تفاوت نمی‌کند. ایمونوبلاتینگ به کمک روش ELISA در عفونت اولیه 2/5 هفته و در عفونت‌های راجعه یک هفته قبل از بروز علائم، بیماری را تشخیص می‌دهد. فعال شدن مجدد بیماری در طی حاملگی باعث افزایش IgG شده و در نوزاد موجب عفونت جنینی می‌شود. فعال شدن مجدد بیماری در حاملگی بعدی با اثرات تراتوژنیک خود موجب بروز سقط می‌گردد و شانس سقط در اینها 3 برابر افزایش می‌یابد. ویروس پاروویروس (Parvovirus B19): پاروویروس B19 همانند CMV است که بررسی‌های مختلف افزایش سقط را با آن نشان داده است (5). شیوع بیماری تقریباً 1% است (32). نکته قابل ذکر در این بیماری افزایش آنتی‌بادی IgM بر علیه HPB19 با افزایش سن مادر است. در یک بررسی 26% افرادی که سقط داشته‌اند در دهه دوم عمر و 44% در دهه سوم آنتی‌بادی مثبت داشته‌اند تأثیر این ویروس بر روی جنین بروز بیماری هیدروپس فتالیس غیر ایمنی و آنمی است. این ویروس عامل بیماری Erythma Infectiosum است. در سال‌های 1887-1986 پس از افزایش شیوع ناگهانی Erythma Infectiosum، IgG در 17- 26% از زنان 15-34 ساله مثبت بوده است و در ده سال آینده هم احتمال ابتلاء بیشتر شده و 80% زنان حامله در معرض خطر قرار خواهند داشت (34،35). روش‌های مختلفی برای اندازه‌گیری آنتی‌بادی وجود دارد IgM به روش Capture ELISA (36) در 1/4% از سرم زنان حامله مثبت گزارش شده است در حالیکه با روش In situ Hybridization در هیچ یک از آنها نتیجه مثبت گزارش نشده است. در بررسی دیگری به کمک روش PCR آنتی‌ژن ویروس اندازه‌گیری گردید که در 24/5% از گروه بیمار و 5% از کنترل مثبت بوده و با اختلاف 005/0p< معنی‌دار است. حتی به کمک روش PCR ثابت شده که آنتی‌ژن ویروس در بافت جفت هم وجود دارد (32،37). در یک بررسی دیگر در 81% از بیماران آنتی‌بادی علیه پاروویروس یافت شده است. این عارضه موجب عفونت بدون علامت نوزادان می‌شود. در این نوزادان IgM ابتدا مثبت است و سپس منفی می‌شود (38). ویروس HIV: یکی از پاتولوژی‌های مهمی که نقش کمی را در عفونت نشان می‌دهد HIV (ایدز) است (39). افرادی که دچار AIDS و HIV هستند، 3 برابر افراد عادی شانس سقط راجعه دارند. مسائل ایمونولوژیک در این مسئله دخیل بوده و به نظر می‌رسد، اختلال در نسبت فاکتورهای ایمنی باعث تشخیص HLA جنین سمی آلوژنیک شده و علیرغم وجود فاکتورهای ایمنی فعال مادر باعث دفع جنین می‌شود. بررسی بسیاری از موارد سقط در HIV ثابت کرده که عدم تعادل بین فاکتورهای ایمنی باعث از دست رفتن جنین می‌شود. Soluble Immune Factor مثل سیتوکینها از عوامل موثر در سقط مکرر است. سیتوکین‌های التهابی (Inflammatory Cytokine) مثل اینترلوکین 1، اینترلوکین 6 و TNF- را در سلول‌های تروفوبلاست جفت زنان مبتلا به HIV و سالم اندازه‌گیری کردند. این سیتوکین‌های التهابی و m RNA آنها در افراد مبتلا بسیار بالاتر بوده و مؤید همان مطلب فوق است که عدم تعادل فاکتورهای ایمنی موجب دفع ایمنی جنین می‌شود. همچنین افزایش سیتوکین‌های التهابی به جنین منتقل و باعث فعال شدن ژن HIV و همچنین باعث فقدان Immune selection تیموس جنین شده، وی را مستعد ابتلا به عفونت بسیار شدید می‌کند. نتیجه‌گیری علل میکروبی زیادی را در مسئله سقط دخیل می‌دانند ولی از آنجائی که هیچیک به تأیید نرسیده الگوریتم خاصی جهت تشخیص نمی‌توان ارائه نمود. بررسی‌های مختلف نتوانسته ارتباط دقیقی بین آنها نشان دهد ولی با این وجود هنوز بسیاری از همکاران در برخورد با یک خانم مبتلا به سقط راجعه TORCH را درخواست می‌کنند و علاوه بر هزینه سنگین، مسائل روانی متعددی را بر بیمار تحمیل می‌کنند. بدین منظور بیماران را براساس میزان خطرات نسبی عفونت به گرو‌ه‌های مختلفی دسته‌بندی کرده‌اند که در جدول شماره 3 آمده است (6). با توجه به این جدول افرادی که از سلامت کامل برخوردار می‌باشند و معاینه فیزیکی آنها مشکل خاصی ندارد و سابقه بیماری مقاربتی ندارند، نیازی به هیچ تست تشخیصی ندارند. گروه دوم افرادی هستند که سالم بوده ولی سابقه‌ای از بیماری‌های مقاربتی را ذکر می‌کنند. در این افراد بررسی کلامیدیا، گنوره و سیفیلیس ضروری است. گروه سوم افراد دچار اختلال ایمنی (Immuno compromised) هستند که حتماً بایستی کشت ترشحات واژن به منظور کشف HSV، لیستریامنوسیتوژن و احتمالاً CMV انجام شود. همچنین اگر بیمار از نظر توکسوپلاسموز سروپوزیتیو باشد، لازم است محصولات حاملگی از نظر وجود کیست توکسوپلاسما مورد بررسی قرار گیرد. در نهایت با توجه به پیشنهاد Joseph Hill در یکی از کتب منابع علمی، بهتر است بطور تجربی بیماران مبتلا به سقط راجعه که احتمال عوامل عفونی برای آنها مطرح می‌گردد تحت یک دوره درمان تجربی به کمک داکسی سیکلین قبل از حاملگی و اریترومایسین به محض حاملگی قرار گیرند (3،40). 2 <p>Abortion is one of the prevalent complication in pregnancy and this definition is cerifined to the termination of pregnancy for many reason before 20 week’s gestation based upon the data of the first day of the last noromal mens if this processes happenes three or more it will be reffered to recurrent miscarriege one of the machanisms responsible for abortion is infection and this problem is more important in spontaneous abortion. In this situation, many infections factors are interfering. Most of them are effective only spontaneous abortion but their role on Recurrent abortion aren’t demonstrated one of the most infection disease During pregnancy is Torch Syndrom that leads Pregnancy to Spontaneous abortion. Despite unrepeatedly syndrom but in many cases unfertunately doing Torch lab exam is the first request Now adays many studies that support the role of Mycoplasma hominis, Ureaplasma Urealyticum , Chlamydia trachematis and Syplise with less Importance have affection on spontaneous abortion also many studies have been showed that CMV is left in body and can be isolated from urine, Saliva, and the other liquid. Because there is no treatment in subsequent pregnancy with it’s tratogenic affect can Resulting Recurrent abortion. There are many different diagnostic Methods including microorganism culture, Serological lab with ELISA, PCR etc that it seems PCR is more accurat. So after diagnose the cause of infection patient should be treated completely before Renewed pregnancy.It should be noticed that with the exception of viruses most of microorganisms reply to medical treatment.</p> 24 35 Mohammad Ali MA Karimzadeh Meybodi محمد علی کریم زاده میبدی Department of Obstet . and Gynecol . of Shahid Sadughi Medical Science of Yazd Department of Obstet . and Gynecol . of Shahid Sadughi Medical Science of Yazd Iran Robabeh R Taheripanah ربابه طاهری پناه Reproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR Reproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR Iran Recurrent abortionInfections 327.pdf Cunningham. Williams obstetrics. 1997; 20th Edition.##James R.scott, Philip J. Danforth?s obstetrics and Gynecology. 1990;6th Edition.##Kenneth J.R MD. kistner?s Gynecology. Principles and practice. 1990; 6th edition. 1995;330-365.##Byrn FW. Infectious causes of recurrent pregnancy loss. Clin Obstet Gynecol. 1986;29(4):925-40.##simpson JL, Mills JL. Infectious abortions. Hum Reprod. 1996;11(3)668-72.##Paul R. Microbiology relevant to recurrent miscarriadge. Clin Obstet & Gynecol. 1994;37(3):722-729.##Key, Chang. Infertility, evaluation and treatment First Edition. 1995;241-243.##Shearer Wt, Reuben J. Role of placental cytokincs and in Hammotion in vertical Transmission of HIV infection. Acta Paediatr suppi. 1997;421:33-8.##Woodrow N, Lamont RF. Bacterial vaginosis: its importance in obstetrics. Hospital Medicine. 1998;59(6):747-50.##Llahi-Camp JM, Rai R, Ison C, Regan L, Taylor-Robinson D. Association of bacterial vaginosis with a history of second trimester miscarriage. Hum Reprod. 1996;11(7)1575-8.##Viniker DA. Hypothesis on the role of sub-clinical bacteria of the endometrium (bacteria endometrialis) in gynaecological and obstetric enigmas. Hum Reprod Update. 1999;5(4)373-85.##Sozio J, Ness RB. Chlamydial lower genital tracts infection and spontaneous abortion. Infectious Diseases in obstet & Gynesl. 1998;6(1):8-12.##Tayla-Robinson D. Tests for infection with chlamyidia Trachomatis. Int STD AIDS. 1996;7(1):19-25.##Gogate A, Deodhar LP. Detection of Chlamydia trachomatic antigen & toxoplasma gondii (IgM) & Mycoplasma hominis (IgG) antibodies by ELISA in women with bad obstertric history. Indian Journal Med Res. 1994;100:19-22.##Harger JH, Etiology of recurrent pregnancy loss and outcome of subsequent pregnancies. Obstet & Gynecol. 1983;62:574-581.##Stray- Pedersen B. Uterine mycoplasma colonization in reproductive Failure. Am Journal obstet gynecol. 1978;307-332.##Munday PE. Spontangous abortion-an infectious aetiology? Br Journal Obstot Gynecol. 1984;91:1177-1180.##Quinn PA, Shewchuk AB. Efficacy of antibiotic therapy in preventing spontaneous pregnancy lossamong couples colonized with genital mycoplasmas. Am Journal Obstet gynecol. 1983;15:145(2):239-44.##Ren P. Yan X. Detection of Chlamydia trachomatis and Ureaplasma Urealyticum from abortedtissues by polymerase chain reaction technique. 1997;32(4):214-6.##Silver HM. Listeriosis during Pregnancy. (Review). Obstet & Gynecol survey. 1998;53(12)737-40.##Mamganiello D, Yearke RR. A 10- years prospective study o f women with a history of recurrentfetal losses fails to identify listeria monocytogenes in the genital tract. Fertil Steril. 1991;56(4):781-2.##Rappaport F. Genital Listeriosis in mother and Fetus during the first trimester of pregnancy. Casereport. Br Journal Obstet & Gynecol. 1984;91:85-102.##Bojko M. Herpes simplex virus infection in women with previous spontaneous abortion. J Perinat Med. 1988;16:193-196.##Robb JA. Intrauterine latent herpes simplex virus infection. I. Spontanews abortion. Hum Rep. 1986;17:1196-1203.##Rad cliffe JJ, Mart CA. Immunity to cytomegaloviruses in women with unexplained recurrentspontanous abortion. Am Journal Reprod Immunol Microbiol. 1986;12(4):103-5.##Sifakis S, Ergazaki M. Evaluation of Parvo B19, CMV and HPV viruses in human aborted materialusing the polymerase chain reaction technique. Eur Jouranl Obsted Gynecol Reprod Biol 1998;76(2):169-73.##Gartner L. Persistence of IgM antibodies to CMV- induced late antigen in pregnancy andpostpartum. Acta Virol. 1983;27(1):86-8.##Luerti M, Santini A. ELISA antibodies to cytomegalovirus in pregnant patients prevalence in andcorrelation with spontaneous abortion. Biol Res Pregnancy Prinatal. 1983;4(4):181-3.##Szkaradkiewicz A, Pieta P. The diagnostic value of anti-CMV HPV-B19 antiviral antibodiesin studies on causes of recurrent aboirtions. Ginekol Pol. 1997;68(4):181-6.##Sukhikh GT. Diagnostic and prognostic value of specific immune response to Cytomegaloviruses inpregnant women with a history of habitual abortion. Akush Ginekol (Mosk). 1992;(3-7):30-3.##Kinney JS, Anderson IJ. Risk of adverse outcomes of pregnancy after human paruovirus B19 infection. Journal Infect Dis. 1988;157(H):663-7.##Wang R, Relationship between human Parvovirus B19 infection and spontaneous abortion. Chung Hua Fu Chan ko Tsa Chih. 1997;32(9):541-3.##yaegashi N. Prevalence of anti-human Parvivirus antibody in pregnant women. Nippon Sanka Fujinka Gakkai Zasshi. 1990;42(2):162-6.##Oka H. A study of epidemiology and fetal effects of human parvovirus B19 surg Gynecol Obstet. 1988;163(3):243-50.##cohen BJ. Dtection of parvovirus B19 specific IgM by antibody capture radio immunosassay. Journal virol Metods. 1997;66(1):1-4.##Djuki s. Intra- amniotic Chlamydia trachomatis infection. Gynecol Obstet Invest. 1996;42(2):109-12.##Koch WC, Adler SP. Intrauterine parvovirus B19 infection may cause an asymptomatic or recurrentpostnatal infection. Pediat Infect Dis J. 1993;12(9):747-50.##Weisser M, Rudin C. Does pregnancy influence the course of HIV infection? Evidence from twolarge Swiss cohort studies. Journal Acquir Immun Defic Synd. Hum Retrovirol. 1998;17(5):404-10.##toth A, Lesser ML. Outcom of subsequent pregnancies following antibiotic therapy after primaryor multiple spontaneous aboritous.##

مقايسه اثر پروژسترون تزريق عضلاني با شياف واژينال در سيكل‌هاي پيشرفته در درمان نازائي(IVF & ET, IUI) Vaginal progestrone versus intramuscular in assisted reproduction (a comparative study) 2 1 پروژسترون يكي از هورمون‌هاي مهم در آماده‌سازي اندومتر جهت باروري جنين مي‌باشد و كمبود اين هورمون گاهاً باعث نازايي و اختلال در خونريزي ماهانه خانمها مي‌گردد. با پيدايش روش‌هاي پيشرفته در درمان نازايي (ART) موارد بروز اين نارسائيها در بيماران افزايش يافته و نياز اين افراد به مصرف پروژسترون خارجي را افزوده است. باتوجه به فرآورده‌هاي گوناگون اين دارو در اين تحقيق سعي شده است كه انواع طبيعي و محلول در روغن (progesterone in oil) را با انواع ديگر آن كه بصورت شياف واژينال يا ركتال استفاده مي‌شود مورد مطالعه و مقايسه قرار گيرد. مطالعه بصورت آينده نگر و با روش Randomized clinical trial بوده و بر روي بيماراني كه تحت درمان در سيكل‌هاي ART قرار داشتند صورت پذيرفته است، روش سوپراوولاسيون، با استفاده از GnRHa+hMG و در طي سال 1375 در مؤسسه رويان بوده است. در طي اين زمان 185 مورد انتقال جنين صورت گرفته كه 88 نفر (گروه اول) بطور اتفاقي تحت درمان با شياف پروژسترون و 97 نفر (گروه دوم) تحت درمان با پروژسترون تزريقي قرار گرفتند. ميزان حاملگي گروه اول 22 مورد (25%) و گروه دوم 25 مورد (25/8%) مي‌باشد، كه از لحاظ آماري نيز اختلاف معني‌داري ندارند (9/0p=). در اين بيماران پروژسترون روز 5 و 7 بعد از تزريق hCG مورد اندازه‌گيري قرار گرفت كه متوسط ميزان پروژسترون سرم در گروه اول برابر با ng/ml52/72 و اين مقدار در گروه دوم ng/ml 49/29 بوده كه لحاظ آماري اختلاف معني‌داري نشان نمي‌دهد (764/0p=). نتيجه حاصل از اين تحقيق نشانگر اين مسئله است كه تقريباً نحوه اثر اين نوع فرآورده‌ پروژستيني در تقويت مرحله ترشحي آندومتر و كمك به لانه‌گزيني جنين يكسان بوده و بايد انتخاب دارو را با توجه به شرايط و تمايل بيمار بعمل آورد. 2 Introduction: Progestrone is one of the important hormones in preparation of uterine endometrium for implantation of the fertilized ovum, and hyposecretion of this hormone can cause infertility and abnormalities in menstruation cycle of the women. With rising Assisted Reproduction comparative Treatment (ART), the number of patients with his abnormality and consequently their need to use external progesterone has increased. Since progesterone exists in different forms, the research is focused upon comparing the natural oil soluble progesterone with other types which are used as vaginal or rectal suppository . Material & Method: A prospective study with randomized clinical trial was done on the patients who were being treated in ART cycles in which superovulation using GnRH-a+hMG was done during 1996 in Royan Institute. Over this period of time, 185 cases of embryo transfusion was performed from which 88 patients (the first group) were randomly treated with progestrone suppository, and 97 (thesecond group) were treated with progestrone injection. Results: Incidence of pregnancy in the first group was 22 (25%) and in the second group was 25 (25.8%), which statistically indicates no significant difference (p=0.90). In these patients progesterone level of the blood serum was measured five and seven days after hCG injection. The average progesterone level in blood serum of the first group was 52.72 ng/ml and of the second group was 49.29 ng/ml, which statistically indicated no significant difference (p=0.764).Conclusion: These findings suggest that the effect of different forms of this progestine drug on promoting secretory phase of endomertium and thus preparing uterus for implantation of the embryo is the same. Therefore, the choice of type drug should be based on the patients condition and their own preference . 35 40 Mahnaz M Ashrafi مهناز اشرفی Iran University of Medical Science Iran University of Medical Science Iran Tahereh T Madani طاهره معدنی Royan Institute Royan Institute Iran Ensieh E Sh.Tehrani انسیه شاهرخ تهرانی نژاد Iran University of Medical Science Iran University of Medical Science Iran Ashraf A Moeini اشرف معینی Iran University of Medical Science Iran University of Medical Science Iran Vaginal ProgestroneLuteal Phase DefectInjectional Progesterone 330.pdf Jones Ges. Newer aspects of the management of infertility JAMA. 19,19:141-1123-1129.##Sterzik K, Dallen back C, Schneider V, Sasse V, Dallenbach Hellweg G. In vitro fertilization. The degree of endometrial insufficiency varieswith the type of ovarian stimulation fertile & Steril. 1988;50:457-462.##Jones HWJR, Jones GS, Andrews MC. The program for in vitro fertilization at Norfolk Fertil & Steril. 1982;38:14-21.##Smitz J, Der roey P, Camusm, Theluteal phase and early pregnancy aftercombined GnRHa. HMG treatment forsuperovulation in IVF or GIFT. Hum Repord. 1988;3:585-590.##Abate A, Brigandi A, Abate FG, Manti F, Unfer V, Perino M, Luteal phase support with 17 alpha- hydroxy progesterone versusunsupported cycles in in vitro fertilization. Gynecol Obstet invest. 1999;48(2):78-80.##Belaisch-Allart J, de Mou zon J. Effect of luteal phase supplementalion in an IVF programme after ovarian stimulation by LHRH analogues. Mullicentric analysis. Contraception fertilite sexualite. 16:654-656.##Araujo E Jr, Ber nardini L, Frederick JL, Asch RH, Bul maceda JP. Praspectiverandomized comparison of human chorionicgonadotropin versus intramuscular progesterone for luteal phase support in assistedreproduction Journal Assisted Reprod Genet. 1994;11(2):74-8.##Abate A, Perino M, Abale FG, Brigandi A, Costabile L, Manli F. Intramuscular versusvaginal administration of progerstrone forluteal phase support after in vitro fertilizationand embryo transfer. Clin Exp Obstet Gynecol. 1999;26(3-4):203-6.##Pouly JL, Bassil S, Frydman R, Hedon B, Nicollet B, Praday. Luteal phase after vaginalprogestrone. Comparative study withmicronized oral progesterone contracept fertile sex. 1997;25(7-8):596-601.##Arlini PGA comparalive, randomized study of three different progesterone.##

بررسي تأثير بروموكريپتين در سندرم تخمدان پلي كيستيك مقاوم به كلوميد The effect of Bromocriptine in the polycystic ovarian syndrome with clomiphene resistant 2 1 شيوع ناباروري 15-10% مي‌باشد (2/11% در شيراز). عدم تخمك‌گذاري حدود 40% از موارد و بيشترين علت عدم تخمك‌گذاري سندرم تخمدان پلي كيستيك (PCOD) مي‌باشد. جهت تحريك تخمك‌گذاري، انتخاب اول درمان با كلوميفن سيترات (C.C) مي‌باشد، اما حدود 20% از بيماران به درمان با دوز حداكثر كلوميفن سيترات هم جواب نمي‌دهند. درمان با بروموكريپتين يكي از راه‌هايي است كه جهت تحريك تخمك‌گذاري در اين بيماران توصيه شده است. هدف اين مطالعه بررسي تأثير بروموكريپتين در آن گروه از بيماران PCOD مقاوم به كلوميد است كه سطح پرولاكتين (PRL) طبيعي دارند. در فاصله زماني فروردين 1376 تا تير ماه 1378، 43 خانم PCOD كه مقاوم به كلوميد بودند در واحد ناباروري دانشگاه علوم پزشكي شيراز مورد بررسي قرار گرفتند. اين بيماران تحت درمان با كلوميد با دوز 200 ميلي گرم در روز، بين روزهاي 5 تا 9 سيكل و همچنين بروموكريپتين 5/2 ميلي‌گرم، دو بار در روز به مدت حداقل 3 سيكل قرار گرفتند. آزمايش‌هاي هورموني مشتمل بر FSH، LH، PRL، DHEA-So4، Testosterone و Progestrone و همچنين وضعيت كلينيكي بيمار قبل و بعد از درمان بررسي گرديد. متعاقب درمان 40% از بيماران قاعدگي منظم پيدا كردند و كاهش قابل ملاحظه‌اي در ميزان پرولاكتين مشاهده گرديد. PRL از mIU/ml 9/269 به mIU/ml174 (001/0p<)، LH از mIU/ml9/17 به mIU/ml9/11 (001/0p<) و نسبت LH/FSH از 4/2 به 5/1 كاهش يافت. 30% از اين بيماران باردار شدند. نتايج معرف اين واقعيت هستند كه تأثير درماني مثبت بروموكريپتين حاصل اصلاح و برگرداندن اشكالات هورموني ناشي از اختلال در محور هيپوتالاموس و هيپوفيز مي‌باشد. 2 Incidence of infertility is approximately 10-15% (11.2% in Shiraz). Anovulation is about 40% of female infertility (46% in Shiraz). PCOD, is the most common cause of anovulation (81.5% in Shiraz) . Clomiphen citrate (CC) is the first line of treatment, but approximately 20% of patients with PCO fail to ovulate with the highest dose of CC. These patients have good response to bromocriptine. The purpose of this study is to evaluate the role of bromocriptine in CC - resistant patient with PCOD. Between March 1997 to July 1999, 43 women, who were considered to have PCOD with normal serum prolactin and also CC failure, were studied in infertility division of Shiraz University of Medical Sciences. They were treated with CC 200mg daily from 5th to 9th day of the cycle and Bromocriptine 2.5mg twice daily for at least 3 months. Hormonal assay (FSH, LH, PRL, DHEA-So4 Testosterone, progesterone) and also clinical changes were monitored pre and post treatment. After treatment 40% of the patient had regular menses and 30% conceived. There was significant decrease in PRL from 269.9 mIU/ml to 174 mIU/ml (p<0.001), LH from 17.9 to 11.5 (p<0.001) and LH/FSH ratio from 2.4 to 1.5 (p<0.001). The result suggests that the therapeutic effects of this treatment may be primarily due to the restoration and improvement of the impaired hypothalamus - pituitary axis. 4 12 Mohammad Ebrahim ME Parsanezhad محمدابراهیم پارسانژاد Department of Obstet . and Gynecol Faculty of Medicine, Shiraz Medical Sciences University Department of Obstet . and Gynecol Faculty of Medicine, Shiraz Medical Sciences University Iran Saeed S Alborzi سعید البرزی Department of Obstet . and Gynecol Faculty of Medicine, Shiraz Medical Sciences University Department of Obstet . and Gynecol Faculty of Medicine, Shiraz Medical Sciences University Iran Shohreh Sh RostamSoolat شهره رستم صولت Department of Obstet . and Gynecol Faculty of Medicine, Shiraz Medical Sciences University Department of Obstet . and Gynecol Faculty of Medicine, Shiraz Medical Sciences University Iran Elham E Kokabi الهام کوکبی Department of Obstet . and Gynecol Faculty of Medicine, Shiraz Medical Sciences University Department of Obstet . and Gynecol Faculty of Medicine, Shiraz Medical Sciences University Iran InfertilitySyndromeBromocriptineClomid Resistant Polycystic Ovary 325.pdf Tielemans E, Burdorf A, Velde ER. Occupationally related exposures and reduced semen quality: a case control study, Fertil- Steril. 1999;7(4):690-696.##Kelestimur F, Unluhizarei K, Bayram- F. Metformin and PCOS, Clin Endocrinal (OXF). 2000;52(2):244-246.##Speroff L, Glass RH, Kase NG. Clinical Gynecologic Endocrinology and infertility. 1999;6th ed, Williams and Willkins Co.##Parsanezhad ME, Alborzi S. Epidemiologic and etiologic aspects of infertility. Yazd University of Medical Sciences Journal Specific issue on infertility. 1998;pp:58-64, Summer.##Mac Kenna TJ. Pathogenesis and Treatment of PCOS. 1998; New England Journal Med, 318:558-62.##Hershlag A, Petterson CM: Endocrine disorder in Novak?s Gynecology 12th ed. Williams & Wilkins CO. 1998;pp:833-86.##Kase NG, Lanfer N: An ovulation in Principle and practice of Clinical gynecology 2nd ed. Churchil livingstone, Co. 1990;pp:363-76.##Carmina E, Rostao F, Maggiore M, Prolactin secretion in PCOS, correlation with steroid Pattern. Acta Endocrinol. 1984;105-99.##Judd SJ, Rigg LA. Yen SSC: The effects of Ovariectory and estrogen treatment on the dopamine inhibition of gonadotropin and prolactin release. Journal Clin Endocrinol Metab. 1979;49:182.##Quigley ME, Rakoff SJ, Yen SSC: increased LH sensitivity to dopamine inhibition in PCOS, Journal Clin Endocrinol Metab. 1981;52:231.##Thorner MO, Besser GM, Jones A, Bromocriptine treatment of female infertility: Report of 13 pregnancies. Br Med Journal. 1975;4:694.##Spruce BA, Kendall-Taylor P, Dunlop W, The effect of bromocriptine in the polycystic ovary syndrome. Clin Endocrinol. 1984;20:281.##Seibel MM, Oskowitz S, Kamrava M, Bromocriptine response in normoprolactinemic Patients with Polycystic ovary disease. A Proliminary report. Obstet Gynecol. 1984;64:213.##Wildt L, Hausler A, Marshall G, Frequency and amplitude of gonadotropin releasing hormone stimulation and gonadotropin secretion in the Rhesus monkey. Endocrinology. 1981;109:376.##Devane G.W., Guzick D.S. Bromocriptine therapy in normoprolactinemic women with unexplained infertility and galactorrhea. Fertility and sterility. 1986;vol46:No6:1026-1031.##Bromocriptine treatment of women with clomiphene-resistant polycystic ovary syndrome. Clinical Endocrinoloy. 1987;26:197-203.##Seibel MM, Oskowitz S, Kamrava M, Bromocriptine response in normoprolactinemic. Patients with polycystic ovary disease. Obstetrics and Gynecology. 1984;64:213-218.##Procile A, Gallardo E, Venegas E: Normoprolactinemic anovulation non responsive to clomiphene citrate, ovulation induction with bromocriptine. Fertility and Sterility. 1990;vil53:No 1:50-55.##Suginami H, Hamadak Y, Kuroda G, Ovulation induction with bromocriptine in normoprolactinemic anovaltory women: Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 1985;62:899-903.##Franks S, Adams J, Mason H, Polson D. Ovulatory disorders in women with PCOD Clinics in OBS & GyN. 1985;pp:605-631.##Kolike K, Aono T, Miyalke A, Tsutsumi H, Matsumoto K: Induction of Ovulation in patients with normoprolactinemic amenorrhea by combined therapy with bromocriptin and clomiphene. Fertil- Steril. 1981;35:138.##Corenbulum B, Taylor PJ. A rationable for the use of bromocriptin in patients with amenorrhea and normprolactinemia. Fertil- Steril. (1980);34:239.##Falachi P, Rocco A, Del Pozo E. Inhibitory Effect of bromocriptine Treatment on Luteinizing Hormone Secretion in PCOS: Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 1986;62(2):348-51.##Tabbakh G, Loutfi IA, Azab I, Bromocriptin in PCOD: A Controlled Clinical Trial: Obstet & Gynecol. 1988;71(3):301-306.##

بررسي اثرات ماتريكس خارج سلولي مصنوعي بر روي عملكرد سلول‌هاي اپي‌تليال اندومتر انسان در محيط In vitro Effects of artificial extracellular matrix on function of human endometrial epithelial cells in vitro 2 1 اهميت ماتريكس خارج سلولي (ECM) در تكامل و كاركرد سلول‌هاي مختلف گزارش شده است ولي اطلاعات كمي در رابطه با نقش آن در كاركرد سلول‌هاي اپي‌تليال اندومتر انسان در دست مي‌باشد. در اين تحقيق اثرات ECM مصنوعي (Matrigel) روي عملكرد سلول‌هاي اپي‌تليال اندومتر با استفاده از تكنيك‌هاي مولكولي مورد بررسي قرار گرفته است. مواد و روشها: نمونه‌هاي اندومتر با اطلاع بيمار و تأييد كميته اخلاقي از 17 زن با باروري قبلي بوسيله هيستركتومي كامل شكمي تهيه شد. بافت به روش آنزيمي و مكانيكي مجزا شده و محلول غني از سلول‌هاي اپي‌تليالي بوسيله سانتريفوژ بدست آمد كه بر روي پلاستيك يا داخل Matrigel به منظور توليد سلول‌هاي پولاريزه كشت داده شد و محيط كشت با يا بدون هورمون پروژسترون (M6-10) به سلولها اضافه شد. مقدار RNA و DNA سلولها پس از استخرج با استفاده از اسپكتوفتومتري اندازه‌گيري شد. نتايج: مقدار كل RNA در سلول‌هاي كشت داده شده روي Matrigel (Pg/cell5/123) بيش از دو برابر سلول‌هاي كشت داده شده روي پلاستيك (Pg/cell4/11/9) بود. هورمون استروئيدي سبب افزايش RNA در سلول‌هاي كشت داده شده در هر دو مدل شده ولي ميزان افزايش در سلول‌هاي كشت داده شده روي ECM بيشتر از پلاستيك بود. سلول‌هاي كشت داده شده روي پلاستيك سريعاً پروليفره شده تا زماني كه تمام سطح پلاستيك را بپوشاند ولي سلول‌هاي كشت داده شده روي ECM داراي تكثير محدود بوده و بعد از 5 روز تكامل پيدا كرده و پولاريزه شد. نتيجه‌گيري: اين نتايج نشان داد كه ECM نقش مهمي در بروز ژن، پولاريزه شدن و تكامل سلول‌هاي اپي‌تليال اندومتر انسان در محيط آزمايشگاه بازي مي‌كند. 2 Introduction: The importance of extracellular matrix (ECM) in development and function of different cells has been reported but little is known about its role in human endometrial epithelial cells. We have examined effects of artificial ECM (Matrigel) on the function of human endometrial epithelial cells using molecular techniques.Materials and methods: Endometrial samples were removed, with informed patient consent and Ethics Committee approval, from 17 previously fertile women undergoing total abdominal hysterectomy. The tissue was dissociated and centrifuged to provide an epithelialrich suspension which was cultured either on plastic or seeded into Matrigel to produce polarised cells and then supplemented with or without progesterone (10-6 M). The amount of nucleic acid content of the cells in both in vitro model systems was examined by DNA, RNA extraction methods. The DNA and RNA content were later measured by spectrophotometry.Results: The amount of total RNA in cells grown on Matrigel (231.5 pg/cell) was more than double that in cells grown on plastic (9.11.4 pg/cell). Cells cultured on both in vitro model systems had RNA induced by steroid hormones, but the extent of induction was greater in cells grown on ECM than those on plastic. Cells cultured on ECM were differentiated and became polarised but cells grown on plastic proliferated until full Confluency .Conclusion: These results suggest that ECM plays an important role in gene expression, polarisation and differentiation of human endometrial epithelial cells in vitro. 40 50 Maerefat M Ghaffari معرفت غفاری نوین Reproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR Reproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR Iran HumanEndometriumECMIn Vitro 329.pdf Junqueira, LC, Carneiro, J, Kelly RO. Basic Histology. 7th ed. Applenton and Lange, Norwalk, Connecticut. 1992;66-71.##Aplin JD, Charlton AK, Ayad S. An immunohistochemical study of human endometrial extracellular matrix during the menstrual cycle and first trimester of pregnancy. Cell Tissue Res. 1988;253(1):231-40.##Streuli CH, Bissell MJ. Expression of extracellular matrix components is regulated by substratum. Journal of Cell Biology. 1990;110(4):1405-1416.##Paulsson M. Basement membrane proteins: structure, assembly, and cellular interactions. Crit Rev Biochem Mol Biol. 1992;27(1-2):93-127.##Kleinman HK. Luckenbill Edds, L, Cannon FW, Sephel GC. Use of extracllular matrix components for cell culture. Anal Biochem. 1987;166(1):1-13.##Hynes RO. Integrins: versatility, modulation, and signaling in cell adhesion. Cell. 1992;69(1):11-25.##Klagsbrun M. The affinity of fibroblast growth factors (FGFs) for heparin; FGF-heparan sulfate interactions in cells and extracellular matrix. Curr Opin Cell Biol. 1990;2(5):857-63.##Frisch SM, Francis H. Disruption of epithelial cell-matrix interactions induces apoptosis. Journal of Cell Biology. 1994;124(4):619-626.##Ruoslahti E, Reed JC. Anchorage dependence, integrins, and apoptosis. Cell. 1994;77(4):477-8.##Pullan S, Wilson J, Metcalfe A, Edwards GM, goberdhan N, Tilly J, HicKman JA, Dive C, Streuli CH. Requirement of programmed cell death in mammary epithelium. Journal of Cell Science. 1996;109(3):631-642.##Freifelder D. Physical biochemistry: applications to biochemistry and molecular biology. WH. Freeman and Company, CA. 1982;494-536.##Caron JM. Induction of albumin gene transcription in hepatocytes by extracellular matrix propteins. Mol Cell Biol. 1990;10(3)1239-43.##Lee EYHP, Lee WH, Kaetzel CS, Parry G, Bissell MJ. Interaction of mouse mammary epithelial cells with collagen substrata: Regulation of casein gene expression and secretion. Proceedings of the national Academy of sciences of the united states of America. 1985;82(5):1419-1423.##Chen LH, Bissell MJ. Transferrin messenger RNA level in the mouse mammary gland is regulated by pregnancy and extracellular matrix. Journal of Biological Chemistry. 1987;262(36):17247-17250.##Parry G, Li J, Stubbs J, Bissell MJ, Schmidhauser C, Spicer AP, Gendler SJ. Studies of Muc-1 mucin expreesion and polarity in the mouse mammary gland demonstrate developmental regulation of Muc-1 glycosylation and establish the hormonal basis for mRNA expression. Journal of Cell Science. 1992;101(1):191-199.##Streuli CH, Bissell MJ. Expression of extracellular matrix components is regulated by substratum. Journal of Cell Biology. 1990;110(4):1405-1416.##Streuli CH, Bailey N, Bissell MJ. Control of mammary epithelial differentiation: Basement membrane induces tissue-specific gene expression in the absence of cell-cell interaction and morphological polarity. Journal of Cell 1991.##Sugrue SP, Hay ED. Responese of basal epithelial cell surface and Cytoskeleton to solubilized extracellular matrix molecules. Journal Cell Biol. 1981;91(1):45-54. Biology. 115(5):1383-1396.##Tomasek JJ, Hay ED, Fujiwara K. Collagen modulates cell shape and cytoskeleton of embryonic corneal and fibroma fibroblasts: distribution of actin, alpha-actinin, and myosin. Dev Biol. 1982;92(1):107-22.##Lessey BA, Damjanovich L, Coutifaris C, Castelbaum A, Albelda SM, Buck CA. Integrin adhesion molecules in the human endometrium. Correlation with the normal and abnormal menstrual cycle. Journal Clin Invest. 1992;90(1):188-95.##Lessey BA, Castelbaum AJ, Sawin SW, Sun J. Integrins as markers of uterine receptivity in women with primary unexplained infertility. Fertil Steril. 1995;63(3):535-42.##Tabibzadeh S, Babaknia A. The signals and molecular pathways involved in implantation, a symbiotic interaction between blastocyst and endometrium involving adhesion and tissue invasion. Human Reproduction. 1995;10(6):1579-1602.##Tang B, Guller S, Gurpide E. Mechanism of human endometrial stromal cells decidualization. 1994;Ann N Y Acad Sci. 734:19-25.##Giudice LC. Growth factors and growth modulators in human uterine endometium. Their potential relevance to reproductive medicine. Fertility and Sterility. 1994;61(1):1-17.##Ghaffari M, Warren MA, Cooke ID. Some effects of leukaemia inhibitory factor supplementation on human polarised endometrial epithelial cells in vitro. Journal of Reproduction and Fertility. 1997;20:13.##Ingamells S, Campbell IG, Anthony FW, Thomas EJ. Endometrial progesterone receptor expression during the human menstrual cycle. Joruanl of Reproduction and Fertility. 1996;106(1):33-38.##Speroff L, Glass RH, Kase NG. Clinical Gynecologyic Endocrinology and infertility (six edition), Londen, Williams & wilkins. 1999;53-70.##

مطالعه تغيير در فاگوسيتوز نوتروفيلها در طول بارداري Study of phagocytosis changes of neutrophils in pregnancy 2 1 عليرغم ايمني اختصاصي كه حين بارداري كاهش مي‌يابد (براي عدم دفع جنين)، قدرت فاگوسيتوز و ميكروب كشي نوتروفيلها (ايمني ذاتي) افزايش مي‌يابد. كاهش ايمني اختصاصي در مراحل اوليه بارداري است و با پيشرفت آن بحد طبيعي مي‌رسد. اما تغييرات فاگوسيتوز با پيشرفت بارداري بخوبي روشن نيست. براي مطالعه اين تغييرات از زناني كه در مراحل مختلف بارداري (15 نفر در سه ماهه اول، 15 نفر در سه ماهه دوم و 15 نفر ديگر در سه ماهه سوم) بودند استفاده شد. بعلاوه 20 نفر نيز بعنوان كنترل (غير باردار) انتخاب شدند. براي آغاز فاگوسيتوز از سوسپانسيون مخمر كشته و آپسونيزه شده به همراه نوتروفيلها استفاده شد. در اثر بلع مخمرها توسط نوتروفيلها و ايجاد انفجار تنفسي، مواد اكسيدانت آزاد مي‌شوند كه اين مواد در حضور لومينول توليد نوري مي‌كند كه مقدار آن با ميزان اين مواد متناسب است. نور توليد شده توسط لومينومتر (تكنيك كميلومينسانس) اندازه‌گيري شد. حداكثر نور ساطع شده بعنوان شاخصي از سرعت و قدرت فاگوسيتوز مورد توجه قرار گرفته است. نتايج بدست آمده نشان مي‌دهد در سه ماهه اول و دوم بارداري فاگوسيتوز افزايش يافته (05/0p<) ولي در سه ماهه سوم فاگوسيتوز افزايشي را (05/0p<) نشان نمي‌دهد. بنظر مي‌رسد عوامل هورموني و سرمي مسئول چنين تغييراتي هستند. 2 Specific immunity decrease in pregnancy, but nonspecific does not increase. The decreasing of specific immunity more takes place in primary stage of pregnancy while it will be normal at the end stage. These changes do not clear in nonspecific immunity (such as phagocytosis). The studies consist of 45 samples (45 pregnant individuals: 15 in first, 15 in second and 15 in third trimester) and 20 control (nonpregnant individuals). The power of neutrophils in killing of pathogens, producing oxidant materials and light emission measured by a luminometer(chemiluminescence technique). Opsonised yeast stimulated the neutrophils. Results: Phagocytosis increase in first and second trimester,but does not increased in third trimester (p<0.05). 50 57 Alireza A Zamani علیرضا زمانی Hamedan Medical Sciences University Hamedan Medical Sciences University Iran Ahmad A Masoud احمد مسعود Tehran University of Medical Sciences Tehran University of Medical Sciences Iran ChemiluminescencePhagocytosisPregnancy 340.pdf Bio. Orbit company 1990. Luminescent analysis. Application note 100.##Bjorksten B. Poly morphonuclear leukocyte function during pregnancy. Scanned. Y. immunol. 1978;8:257-262.##Colbern and Main Immunology of the maternal placental interface in normal pregnancy. Seminar in perinatalogy. 1991;15(3):196-205.##Coulam. Carrolyn. B Immunological obstetrics. 1992;First edition.##Hynes MK. Shepleyks Cytokine production in first trimester choronic villi. Cell immune 1993.##King H. On the nature and function of human uterine granular lymphocytes. Immunol. Today. 1991;12(12):432-435.##Kordon Drouva SV. Gonadotropin regulation oesterogens and immune system. Horn Res. 1992;37(sup3):11-15.##Lahita RG. The effect of sex hormones on the immune system in pregnancy. Am. Journal of Repro. Immunol. 1992;28:136-137.##Mitchell the role of the phagocyte in host-parasite interacions. Am Journal Obst. Gyncol. 1970;108(5):687-697.##Saji the fetus as an allograft. Am Journal Obstet Gynecol. 1992;251-256.##Shibaya Study on nonspecific immunity in pregnant persons is Journal of Repro Immune. (AJRI). 1991;26:76-81.##William?s Cunnigham, FG. William?s Obstetrics. 1993;19th edition.##

ناباروري و جنبه‌هاي رواني‌ـ‌ اجتماعي Psycho-Social aspects of infertility 2 1 در مقاله حاضر كه مروري بر پژوهش‌هاي انجام شده در مورد جنبه‌هاي رواني‌‌ـ اجتماعي ناباروري مي‌باشد، دو گروه از پژوهشها را مي‌توان در نظر گرفت: 1- پژوهش‌هايي كه براي ناباروري دلايل روانشناختي قائل هستند. 2- پژوهش‌هايي كه به مطالعه پي‌آمدهاي روانشناختي ناشي از ناباروري پرداخته‌اند. گروه اول تفاوت‌هاي شخصيتي و تفاوت‌هايي در ميزان استرس را در ميان جمعيت نابارور در مقايسه با جمعيت غير نابارور از جمله دلايل موثر براي بروز ناباروري معرفي كرده‌اند. گروه دوم كه بيشتر مطالعات كنوني را نيز شامل مي‌شود هم به شيوه كيفي و توصيفي و هم به شيوة كمي و آزمون فرضيه پي‌آمدهاي روانشناختي ناباروري را مطالعه نموده است. بطور كلي مطالعات كيفي و توصيفي، ناباروري را بعنوان يك تجربة ناگوار (خصوصاً براي زنان) معرفي مي‌كنند. مطالعات كمي، آشفتگي، استرس، افسردگي، پايين بودن عزت نفس، نارضايتي زناشويي و نارضايتي جنسي را بعنوان پي‌آمدهاي روانشناختي ناباروري معرفي مي‌نمايند. البته در نتايج مطالعات كمي ناهمخواني بيشتري در مقايسه با نتايج مطالعات كيفي مشاهده مي‌شود. در تبيين اين ناهمخوانيها، دو گروه مشكلات روش شناسي (از قبيل نمونه‌گيري، ابعاد زماني، گروه‌هاي كنترل و تغييرات بين فرهنگي) و مشكلات تئوريكي (مفهوم سازي) پيشنهاد مي‌شود. در انتها تفاوت‌هاي جنسي در مورد تجربة ناباروري مورد بحث واقع شده است. اين مقاله نشان مي‌دهد كه علاوه بر جنبه‌هاي فيزيولوژيك جنبه‌هاي رواني‌ـ اجتماعي ناباروري نيز بايد بيشتر مورد توجه قرار گيرد. 2 In this review article , the research conducted on the social and psychological aspects of infertility have been divided into two groups : The first group of studies believe that infertility may have psychological causes ( such as differences in personality and experiencing stress between infertile and non-infertile people). The second group of studies examine the psychological Consequences by both qualitative and quantitative methods. In general , the qualitative studies describe infertility as a devastating experience , especially for women. The qualitative studies try to measure the psychological consequences hypothesis by standard tests . The studies have shown that infertile subjects are different from non-infertile subjects with respect to psychological distress , stress , depression , self-steem , marital satisfaction and sexual satisfaction . However , in the quantitative studies compared to qualitative studies , there is more inconsistency in the literature . This may be due to both methodological problems (such as sampling , temporal dimension , control groups and cross-cultural variation ) and theoretical (conceptual ) problems . In the end , gender differences in infertility experience have been discussed and the review articles show that , in addition to psychololgical factors , we need to pay more attention to social and psychological aspects of infertility . 57 69 Reza R Kormi Nouri رضا کرمی ‏نوری Psychology Department, Faculty of Psychology and Educational Sciences, Tehran University Psychology Department, Faculty of Psychology and Educational Sciences, Tehran University Iran InfertilityPsychological factorsquantitative & qualitative studies 328.pdf Abbey. A., Andrews. F. M. and Halman, L. J. Infertility and parenthood: does becoming a parent increase well-being? Journal of Consulting and Clinical Psychology. 1994; 62: 398-403.##Abbey. A., Andrews. F. M. and Halman, L. J. Infertility and subjective well-being: The mediating roles of self-esteem. internal control. And interpersonal conflict. Journal of marriaqe and the Family. 1992; 54: 408-417.##Abbey. A., Andrews. F.M. and Halman, L. J.Provision and receipt of social support and disregard: what is their impact on the marital life quality of infertile and fertile couples? Journal of presonality and Social psychology. 1995; 68: 455-296.##Abbey. A., and Halman, L. J. The role of perceived control, attributions, and meaning in members’ of infertile couples well-being. Journal of Social and Clinical psychology.1995;14: 271-296.##Abbey. A., Andrews. F.M. and Halman, L. J. Gender’s role in responses to infertility. Psychology of Women Quarterly.1991;15: 295-316.##Abbey. A., Halman. L. J. and Andrews F. M. Psyehosoeial treatment and demographic predictors of stress associated with infertility. Fertility and Sterility.1992; 57: 122-128##Andrews. F. M. Abbey. A. and Halman. J. Is fertility-problem stress different? The dynamics of stress in fertile and infertile couples. Fertility and Sterlitiy.1992; 57: 1247-1253.##Astor. J. and pawson. M. The value of psychometric testing in the investigation of infertility. Journal of psychosomatic Obstetrics and Gynecology.1986; 5: 107-111.##Atherton. F. and Howel. D. Psychological morbidity and the availability of assisted conception: a group comparison study. Journal of Public Health Medicine. 1995; 17: 157-160.##Baluch. B. Manyande. A. Aghssa. M. and Jafari R. Failing of conceive with in vitro fertilization: the middle eastern experience. Psychological Reports. 1993; 72: 1107-1110.##Becker. G. Metaphors in disrupted lives: Infertility and cultural constructions of continuity. Medical Anthropology Quarterly.1994;8:383-410.##Bell, J. S. Psychological problems among patients attending an infertility clinic Journal of psychosomatic Research.1981; 25: 1-3.##Berg, B. J. and Wilson, J. F. Psychiatric morbidity in the infertility population: a reconceptualization. Fertility & Stertility. 1990; 53: 654-661.##Bernstein, J. Mattox, J. H. and Kellner, R. Psychological status of previously infertile couples after a successful pregnancy. Journal of Obstetrics and Gynecology and Neonatal Nursing. 1988; 17:404-408.##Bernstein, J. potts. N. and Mattox, J. Assessment of psychologic dysfunction associated with infertility. Journal of Obstetrics and Gynecology and Neonatal Nursing.1985; 14: 63-66.##Brand. H. J. Roos. S. S. and van der Merwe. A. B. Psychological stress and infertility part1: psychological reaction patterns. British Journal of Medical psychology.1982; 55: 379-384.##Brand. H. J. Roos. S. S. and van der Merwe. A. B. Psychological stress and infertility part2: psychological reaction patterns. British Journal of Medical psychology.1982; 55: 379-388.##Boivin. J. and Takefman. J. E. Stress level across stages of in vitro fertilization in subsequently pregnant and nonpregnant women. Fertility and Sterility.1995; 64: 802-810.##Callan. V. J. The personal and marital adjustment of mothers and of voluntarily and involuntarily childless wives. Journal of Marriage and the Family.1987; 49: 847-856.##Chandra. P. S. Chaturvedi. S. K. lssac. M. K. Chitra. H. Sudarshan. C. Y. and Beena. M. B. Marital life among infertile spouses: the wife’s perspective and its implications in therapy. Family Therapy.1991; 18:145-154 .##Connolly, K.J. Edelmann, R. Cooke. L. D. and Robson, J. The impact of infertility on psychological functioning. Journal of psychosomatic Research.1992; 36: 459-468.##Daniluk, J. C. Leader. A. and Taylor. P. L. psychological and relationship changes of couples undergoing an infertility investigation: some implications for counseling. British Journal of Guidance and Counseling.1987; 15: 29-36 .##Domar, A. D. Broome. A. Zuttermeister, P. C. Seibel. M. and Friedman. R. The prevalence and predictability of depression in infertile women. Fertility and Sterility.1992; 58: 1158-1163.##Domar, A. D. Zuttermeister, P.C. Seibil. M. and Benson. H. Psychological improvement in infertile women after behavioral treatment:a replication. Fertility and Sterility.1992;58:144 -147.##Downey, J. and Mckinney. M. The psychiatric status of women presenting for infertility evaluation. American Journal of Orthopsychiatry. 1992; 62:196-205.##Dunkel Schetter. C. and Lobel.M. psychological reactions to infertility.In psychological Adjustment to Infertility ed. A. C. Dunkel Schetter and A. L. Stanton. 1991; PP.29-57. Plenum. New York.##Edelmann. R. J. and Connolly, K. psychological aspects of infertility. British Journal of Medical psychology.1986; 59: 209-219.##Edelmann. R. J. Connolly, K. J. and Bartlett. H. Coping strategies and psychological adjustment of couples presenting for IVF. Journal of psychosomatic Research.1994; 38: 355-364.##Freeman, E. W. Garcia, C. W. and Rickels, K. Behavioral and emotional factors: comparisons of anovulatory infertile women with fertile and other infertile women. Fertility and Sterility.1983; 40: 195- 201.##Fagan, P. J. Schmidt. C. W. Rock, J. A. Damewood. M. D. Halle. E. and Wise, T. N. Sexual functioning and psychologic evaluation of in vitro fertilization couples. Fertility and Sterility.1986; 46:668-672.##Freeman, E. W. Boer. A. W. Rickels, K. Tureck, R. and Mastroianni, L. Jr psychological evaluation and support in a program of in vitro fertilization and embryo transfer. Fertility and Sterility.1985; 4: 48-53.##Greil, A. L. Not Yet pregnant: Infertile Couples in Contemporary America. Rutgers University press. New Brunswick . NJ. 1991.##Greil, A. L. A secret stigma: the analogy between infertility and chronic illness and disability. In Advances in Medical Sociology. 1991;2.ed.G.Albrecht and J.Levy, pp. 17-38. JAL Press. Greenwich. CT.##Hirsch, A. M. and Hirsch, S. M The effect of infertility on marriage and self-concept. Journal of Obstetrics and Gynecological Neonatal Nursing. 1988; 18: 13-20.##Harrison, R. F. O’Moore, R. R. and O’Moore, A. M. Stress and fertility: some modalities of investigation and treatment in couples with unexplained infertility in Dublin. International Journal of Fertility.1986; 3: 153-159.##Harrison, K. L. Callan. V. J. and Hennessey, J. F. Stress and semen quality in an in vitro fertilization program. Fertility and Sterility.1987; 48: 633-636.##Kedem, P. Mikulincer. M. and Nathanson, Y. E. psychological aspects of male infertility British Journal of Medical psychology.1990; 63: 73-80.##Koropatnick. S. Daniluk, J. and pattinson, H. A. Infertility a non-event transition. Fertility and Sterility. 1993; 59: 163-171.##Lalos, A. Lalos, O. Jacobsson, L. and von Schoultz, B. The psychosocial impact of infertility two years after completed surgical treatment. Acta Obstetrica and Gynecologica Scandinavica.1985; 64: 258-262.##Lorber, J. and Bandlamudi. L. The dynamics of marital bargaining in male infertility. Gender and Society.1993; 7: 32-49.##Miall, C. E. perceptions of informal sanctioning and the stigma of involuntary childlessness. Deviant Behavior.1985; 6: 383-403.##Mahlstedt. P. MacDuff. S. and Bernstein. J. Emotional factors and the in vitro fertilization and embryo transfer process. Journal of IVF-ET.1987; 4: 232-236.##Mendola, R. Tennen. H. Affleck, G, McCann, L. Fitzgerald. T. Appraisal and adaptation among women with impaired fertility. Cognitive Therapy and Research.1990; 14: 59-93.##Morrow, K. A. Thoreson R. W. and Penney. L. L. Predictors of psychological distress among infertility elinic patients. Journal of Consulting and Clinical Psychology.1995; 63: 163-167.##Newton. C. Hearn. M. and Yuzpe. A. psychological assessment and follow up after in vitro fertilization: assessing the impact of failure. Fertility and Sterility.1990; 54: 879-886.##O’Moore. A. M. O’moore. R. R. Harrison. R. F. Murphy. G. and Carruthers. M. E. psychosomatic aspects in idiopathic infertility. effects of treatment with autogenic training. Journal of psychosomatic Research.1983; 27: 145-151.##Olshansky, E. F. Identity of self as infertile: an example of theory-generating research. Advances in Nursing Sciences.1987; 9: 54-63.##Pepe, M. V. and Byrne, J. Women’s perceptions of immediate and long-term effects of failed infertility treatment on marital and sexual satisfaction. Family Relations.1991; 40: 303-309.##Paulson, J. D. Haarmann, B. S. Salerno, R. L. and Asmar, P, An investigation of the relationship between emotional maladjustment and infertility. Fertility and Sterility.1988; 49: 258-262.##Sabatelli. R. M. Meth. R. L. and Gavazzi, S. M. Factors mediating the adjustment to involuntary childlessness. Family Relations.1988; 37:338-343.##Snarey, J. Son. L. Kuehne, V. S. Hauser. S. and Vaillant. G. The role of parenting in men’s psychosocial development: a longitudinal study of early adulthood. infertility and midlife generativity. Developmental psychology.1987; 23: 593-603.##Sabatelowski, M. With Child in Mind: Studies of the personal Encountrer with Infertility. University of pennsylvania press. philadelphia. 1993.##Stanton. A. Tennen. H. Affleck. G. and Mendola R. Cognitive appraisal and adjustment to infertility. Women and Hedlth.1991; 17: 1-15.##Sandelowski. M. Holditch-Davis. D. and Harris. B. G. Living the life: explanations of infertility Sociology of Health and Illness.1990;12:195-215.##Schenker. J. G, Meirow, D. and Schenker. E. Stressand human reproduetion. European Journal of Obstetrics and Gynecdogieal Reproductive Biology. 1992; 45: 1-8.##Schover, L. R. Collins, R, L. and Richards S. psychological aspects of donor insemination: evaluation and follow-up of recipient couples. Fertility and Sterility.1992; 57: 583-590.##Slade, P. Raval. H. Buck. p. and Lieberman, B. E. A 3-year follow-up of emotional, martial. and sexual functioning in couples who were infertile. Journal of Reproductive and Infant psychology. 1992 ; 10: 233-243.##Sankelowski, M. The color gray: ambiguity and infertility. Image Jouranl of nursinq Scholarship. 1987; 19: 70-74 .##Stoleru. S. Tegles. J. P. Fermaninan. J. and Spira. A. psychological factors in the aetiology of infertility: a prospective cohort study. Human Reproduction.1993; 8: 1039-1046.##Ulbrich. p. M. Coyle. A. T. and Llabre. M. M. Involuntary childlessness and matrital adjustment: his and hers, Journal of Sex and Marital Therapy. 1990;16: 147-158.##Wasser, S. K. psychosocial srtess and infertility: cause or effect ? Human Nature.1994; 5: 206-293.##Wasser. S. K. Sewall. G. and Soules. M. R. psychosocial stress as a cause of infertility. Fertility and Sterility.1993; 59: 685-689.##Wright. J. M. Lecours. A. and Sabourin, S. psychosocial disrtess and infertility: a review of controlled research. International Journal of Fertility. 1989; 34: 126-142.##Wright.J.Duchesne. C. Sabourin. S. Bissonnette, F, Benoit. J. and Ferard. y. psychosocial distress and infertility: men and women respond differently. Fertility and Sterility.1991; 55: 100-108.##

تأثير سايمتيدين بر تعداد و درصد تحرك اسپرم و برگشت پذير بودن اثر آن The Reversible Effect of Cimetidine on Number and Motility rat Spermatozoa 2 1 در تحقيق حاضر اثر سايمتيدين بر حركت و تعداد اسپرم و همچنين برگشت‌پذير بودن اثر آن به روي 80 رت (rat) نر مورد بررسي قرار گرفت. رتها به هشت گروه تقسيم شدند:گروه كنترل (گروه 1)، گروه شاهد (گروه 2) و پنج گروه آزمايشي كه هر كدام سايمتيدين را براي مدت‌هاي يك هفته (گروه 3)، دو هفته (گروه 5)، چهار هفته (گروه 6) پنج هفته (گروه 7) به ميزان mg/kg100 در روز دريافت كردند. رت‌هاي گروه هشت مدت پنج هفته سايمتيدين دريافت كردند و هفته ششم هيچ داروئي دريافت ننمودند نتايج نشان داد كه تعداد اسپرم در گروه‌هاي آزمايشي، نسبت به كنترل و شاهد كاهش يافت و درصد اسپرم‌هاي متحرك در گروه‌هاي آزمايشي نسبت به كنترل كاهش پيدا كرد. در گروه هشت مشاهده شد كه اين تغييرات پس از قطع سايمتيدين برگشت پذير مي‌باشد. از نتايج اين تحقيق چنين به نظر مي‌رسد كه تغييرات حاصله احتمالاً به علت اثر مستقيم سايمتيدين بر روي لوله‌هاي سمني‌فروس باشد. 2 This study carried out to investigate the reversible effect of cimetidine on: Sperm count and Sperm motility in male rat. 80 mature male Charles River rats (285 - 315 gr) divided in to 8 groups: blank (G1), received no treatment at all, control, received 100 mg / kg / day normal saline IP for 5 weeks (G2).The other six groups received 100 mg / kg / day cimetidine IP for 1 Week (G3), 2 weeks (G4), 3 weeks (G5), 4 weeks (G6), 5 weeks (G7) 6 weeks (G8). However G8 during the last sixth week received notreatment. When the animal was anesthetized sperm samples taken from vasdeferens to investigate its motility and counts.Results revealed that sperm count decreased in the test compare to control and blank groups and nonmotile sperm increased in test (G3- G7) compare to control groups. However in G8 which sperm count and motility were analyzed one week after termination of cimetidine injection there were no significant differences in this parameter between controls and test. So the effect of cimetidine on sperm count and motility is reversible. We concluded that the reduction in sperm count and motility may be due to the direct effect of cimetidine on seminiferus tubules, which is reversible. 69 77 Marjaneh M Kazerooni مرجانه کازرونی Department of physilolgy, Medicin faculty, Shiraz Medical Sciences University Department of physilolgy, Medicin faculty, Shiraz Medical Sciences University Iran Gity G Nayeri Kaman Department of physilolgy, Medicin faculty, Shiraz Medical Sciences University Department of physilolgy, Medicin faculty, Shiraz Medical Sciences University Iran RatCimetidineSpermSpermatogenesis 341.pdf Acosta AA, Swanson RJ, Ackerma SB, Kruger TF, Vanzyl JA, Menkveld R. Human spermatozoa in Assisted Reproduction. WILLIAMS & WILKINS. 1990;pp:74-75.##Apgar J, Zinc and reproduction, Ann. Rev. Nutr. 1985;5:43-68.##Bokalkin GY, Isibezoy VV, Sjutkin EA, Veselovea SP, Novilov ID, Vribosheev DG. Latralization of LHRH in the rat hypothalamus. Brain. Res. 1984;296:361-364.##Claude K, Lardinois MD, Ernest L, Mazzaferri MD. Cimetidine blocks testosterone synthsis. Arch intern med. 1985;145:920-922.##Cruz ME. Moran JC, Jaramilo CP, Dominguez R. Effects of unilaterai lesion in the anterior hypothalamas on spontaneous ovutation in both normal of the mispayed rats. Biology of Reprod. Supplcment. 1988;38:189.##Gerendai I, Rotsytein W, Marchetti B, Scapagnini V. LHRH content changes in the mediobasal hypothalamus after unitateral ovariectomy. In A Polleri and R. Mackod, Neuroen do crinolgoy: Bilogical and clinical Aspects. Proceedign of Sereno symposia Academia press, New York. 1974;19:97-102.##فریناز نصیری نژاد، بررسی هسته قدامی هیپوتالاموس در ارتباط با کنترل نامتقارن آن بر تنظیم عمل بیضه‌ها، مراکز سیر و گرسنگی و مرکز تنظیم درجه حرارت در موش صحرائی نر پایان نامه کارشناسی ارشد فیزیولوژی انسانی، 1372.##فریناز نصیری نژاد، گیتی دخت نیری کمان و مسعود ستوده، چگونگی کنترل هیپوتالاموس بر تنظیم عمل بیضه‌ها ارائه و چاپ در هفتمین کنگره بین‌المللی پزشکی جغرافیائی دانشگاه علوم پزشکی شیراز 1373.##فریناز نصیری نژاد و گیتی دخت نیری کمان. برتری هسته قدامی راست هیپوتالاموس بر چپ در کنترل ترشح تستوسترون. دوازدهمین کنگره فیزیولوژی و فارماکولوژی ایران 1374. صفحه 84.##Nance DM, Bharganam and Mybit GA. Futher evidence for hypothalamic asymmetry in endocrine control of the ovary.##Nayeri Kaman GD, Nasiri Nejad F. The possibility of hypothalamic anterior function in asymmetric control of testieular Function. Novel foats in neuroen-docrinology. A Stellitic symposium of the third Congress of Faops. Nov 13-14X lan, china. 1944;pp:33.##Nayeri Kaman GD, Kazerooni M, Kumar PVN. Effects of Cimetidine on reproductive system activity in male rat. 11th Znternational congress of Geographic medicine shiraz, Iran. 1998;pp:135.##Nayeri Kaman, Kazerooni M. Cimetidine and sperm. 14th Iranian Congress of Physiology and Pharmacology. Congress Abstract. 1999;pp:217.##Stphen J, Winters MD, James L, Banks AB, and D. Lynn loriaux MD. Cimetidine is an antianderogen in the rat. Gastroenterology. 1978;76:504.##Van Thiel DH, Gavaler JS, Smith WI, Paul G. The New England Journal of Medicine. 1979;300:1012-1015.##Van Thiel DH, Cavaler JS, Heyla & Susen B. An evaluation of the antiandrogen effects associated with H2 antagonist therapy. Scand Journal. Gastroenterol. Supplement. 1987;22(136):24-28.##